Эшерихии

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

     Эшерихии - наиболее распространенные аэробные бактерии кишечника, способные при определенным условиях вызывать обширную группу заболеваний человека, как кишечной (диарея), так и внекишечной (бактеремия, инфекции мочевыводящих путей и др.) локализации. Основной вид - E.coli (кишечная палочка) - самый распространенный возбудитель инфекционных заболеваний, вызываемых энтеробактериями. Этот возбудитель является показателем фекального загрязнения, особенно воды. Коли - титр и коли - индекс часто использовали как санитарные показатели. Эшерихии входят в состав микрофлоры толстого кишечника млекопитающих, птиц, пресмыкающихся и рыб.

Культуральные свойства. На жидких средах E.coli дает диффузное помутнение, на плотных средах образует S- и R- формы колоний. На основной для эшерихий среде Эндо лактозоферментирующие кишечные палочки образуют интенсивно красные колонии с металлическим блеском, не ферментирующие - бледно- розовые или бесцветные колонии с более темным центром, на среде Плоскирева - красные с желтоватым оттенком, на среде Левина - темно- синие с металлическим блеском.

Биохимические свойства. Кишечная палочка в большинстве случаев ферментирует углеводы (глюкозу, лактозу, маннит, арабинозу, галактозу и др.) с образованием кислоты и газа, образует индол, но не образует сероводород, не разжижает желатин.

Антигенная структура. Какие - либо существенные морфологические различия между патогенными и непатогенными кишечными палочками не обнаружены. Их дифференциация основана на изучении антигенных свойств. Среди поверхностных антигенов выделяют полисахаридные О- антигены, жгутиковые Н- антигены и капсульные полисахаридные К- антигены. Известно более 170 вариантов О- антигенов (это соответствует принадлежности возбудителя к определенной серогруппе) и 57 - Н- антигенов (принадлежность к серовару). В состав диареегенных (вызывающих диарею) кишечных палочек входят 43 О- группы и 57 ОН- вариантов.

Основные факторы патогенности диареегенных E.coli.

  1. Факторы адгезии, колонизации и инвазии, связанные с пилями, фимбриальными структурами, белками наружной мембраны. Они кодируются плазмидными генами и способствуют колонизации нижних отделов тонкой кишки.
  2. Экзотоксины: цитотонины (стимулируют гиперсекрецию клетками кишечника жидкости, нарушают водно - солевой обмен и способствуют развитию диареи) и энтероцитотоксины (действуют на клетки стенки кишечника и эндотелия капилляров).
  3. Эндотоксин (липополисахарид).

В зависимости от наличия различных факторов патогенности диареегенные кишечные палочки разделены на пять основных типов: энтеротоксигенные, энтероинвазивные, энтеропатогенные, энтерогеморрагические, энтероадгезивные.

  1. Для патогенных кишечных палочек характерна выработка бактериоцинов (колицинов).

Энтеротоксигенные E.coli имеют высокомолекулярный термолабильный токсин, схожий по действию с холерным, вызывают холероподобную диарею (гастроэнтериты у детей младшего возраста, диарею путешественников и др.).

Энтероинвазивные кишечные палочки способны проникать и размножаться в клетках эпителия кишечника. Вызывают профузную диарею с примесью крови и большим количеством лейкоцитов (показатель инвазивного процесса) в испражнениях. Клинически напоминает дизентерию. Штаммы имеют некоторое сходство с шигеллами (неподвижные, не ферментируют лактозу, обладают высокими энтероинвазивными свойствами).

Энтеропатогенные E.coli - основные возбудители диареи у детей. В основе поражений - адгезия бактерий к эпителию кишечника с повреждением микроворсинок. Характерна водянистая диарея и выраженное обезвоживание.

Энтерогеморрагические кишечные палочки вызывают диарею с примесью крови (геморрагический колит), гемолитико - уремический синдром (гемолитическая анемия в сочетании с почечной недостаточностью). Наиболее частый серотип энтерогеморрагических кишечных палочек - О157: Н7.

Энтероадгезивные E.coli не образуют цитотоксины, слабо изучены.

Эпидемиология. Основной механизм распространения диареегенных кишечных палочек - фекально - оральный. Заражение может происходить через пищу, воду, при уходе за животными. Поскольку эшерихии обитают в кишечниках многих видов животных, конкретный источник заражения установить сложно. Контактный путь заражения может быть в закрытых заведениях. Энтеропатогенные и энтероинвазивные E.coli - наиболее частые причины внутрибольничных вспышек эшерихиозов.

Лабораторная диагностика. Основным подходом является выделение чистой культуры на дифференциально - диагностических средах и ее идентификация по антигенным свойствам. Ставят РА с набором поливалентных ОК (к О- и К- антигенам) сывороток, затем - адсорбированных О- сывороток и прогретыми при 100 градусах Цельсия (для разрушения К- антигенов) культурами.

Биохимическая дифференциация имеет дополнительное значение. Идентификация диареегенных типов возможна при выявлении специфических маркеров (энтерогеморрагические кишечные палочки не ферментируют сорбит, а серовар О157: Н7 не проявляет бета - глюкуронидазной активности).

 

 

Сальмонеллы.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

     Сальмонеллы - большая группа энтеробактерий, среди которых различные серотипы - возбудители брюшного тифа, паратифов А, В и С и наиболее распространенных пищевых токсикоинфекций - сальмонеллезов. По признаку патогенности для человека сальмонеллы разделяют на патогенные для человека- антропонозы (вызывают брюшной тиф и паратифы А и В) и патогенные для человека и животных - зоонозы (вызывают сальмонеллезы). Несмотря на значительные различия сальмонелл по антигенным характеристикам, биохимическим свойствам, вызываемым ими заболеваниям, по современной, но недостаточно удобной и совершенной классификации выделяют два вида - S.bongori и S.enteritica. Последний разделен на подвиды, из которых наибольшее значение имеют подвиды choleraesuis и salamae. Подвид choleraesuis включает наибольшую часть известных сероваров сальмонелл (около 1400 из примерно 2400).

Морфология. Прямые грамотрицательные палочки размером 2-4 x 0,5 мкм. Подвижны благодаря наличию перитрихиально расположенных жгутиков.

Культуральные и биохимические свойства. Факультативные анаэробы, хорошо растут на простых питательных средах. Оптимум рН- 7,2-7,4, температуры - +37. Метаболизм - окислительный и бродильный. Сальмонеллы ферментируют глюкозу и другие углеводы с образованием кислоты и газа (серотип Salmonella typhi газообразования не вызывает). Обычно не ферментируют лактозу (на средах с этим углеводом - безцветные колонии), сахарозу. Оксидаза- отрицательны, каталаза - положительны. Реакция Фогеса - Проскауэра отрицательна.

На основании биохимических (ферментативных) свойств сальмонеллы разделены на четыре группы. Характерные признаки сальмонелл - образование сероводорода, отсутствие продукции индола и аэробность. Для выделения используют дифференциально - диагностические среды (висмут - сульфит агар, среды Эндо, Плоскирева, SS агар) и среды обогащения (селенитовый бульон, желчный бульон, среда Раппопорта). S- формы образуют мелкие (от 1 до 4 мм) прозрачные колонии (на среде Эндо - розоватые, на среде Плоскирева - безцветные, на висмут - сульфит агаре - черные, с металлическим блеском). На жидких средах S- формы дают равномерное помутнение, R- формы - осадок.

Антигенная структура. Выделяют О-, Н- и К- антигены. К группе К- антигенов относят Vi- антигены (антигены вирулентности). Благодаря более поверхностному расположению (чем О- антигены) Vi- антиген может препятствовать агглютинации культур сальмонелл О- специфической сывороткой (экранирование). Для дифференциации сальмонелл применяют схему (серологическую классификацию) Кауфманна - Уайта.

В соответствии со структурой О- антигенов сальмонеллы подразделяют на О- группы (67 серогрупп), в каждую из которых входят серологические типы, отличающиеся строением Н- антигенов. Принадлежность сальмонелл к определенному серовару устанавливают при изучении антигенной структуры в соответствии со схемой Кауфманна - Уайта. Примеры: серотип S.paratyphi A относится к серогруппе А, S.paratyphi В - к серогруппе В, S.paratyphi С - к группе С, S.typhi - к серогруппе D.

Факторы патогенности.

1.Факторы адгезии и колонизации.

  1. Способность к внутриклеточному паразитированию, препятствовать фагоцитозу, размножаться в клетках лимфоидной ткани выражены у возбудителей брюшного тифа, паратифов А и В, способствуя хроническому носительству.

3.Эндотоксин (ЛПС).

  1. Термолабильные и термостабильные энтеротоксины.
  2. Цитотоксины.
  3. Существенное значение имеют плазмиды вирулентности и R- плазмиды.
  4. Vi - антиген ингибирует действие сывороточных и фагоцитарных бактериоцидных факторов.

Основными факторами патогенности сальмонелл является их способность проникать в макрофаги и размножаться в лимфоидных образованиях собственно слизистого слоя тонкого кишечника (пейеровы бляшки, солитарные фолликулы), а также продукция эндотоксина.

Патогенез поражений. Различия клинических форм заболеваний, вызываемых сальмонеллами, зависит от вирулентности и дозы возбудителя и состояния иммунной системы организма. Обычная доза, вызывающая клинические проявления - 10- 10бактерий, меньшая доза достаточна при иммунодефицитах, гипохлоргидрии и других заболеваниях желудочно - кишечного тракта.

Выделяют следующие основные формы сальмонеллезной инфекции:

- гастроинтестинальную;

- генерализованную (тифоподобный и септикопиемический варианты);

- бактерионосительство (острое, хроническое, транзиторное).

Существенные патогенетические особенности инфекционного процесса, вызываемого серотипами S.typhi, S.paratyphi A,B, являются основанием для выделения тифо- паратифозных заболеваний в самостоятельную нозологическую группу. Каждой фазе патогенеза соответствует клинический период заболевания и своя тактика лабораторного обследования. Основные фазы - внедрения возбудителя (соответствует инкубационному периоду), первичной локализации возбудителя (продромальный период), бактеремии (первая неделя заболевания), вторичной локализации сальмонелл (разгар заболевания - 2-3 недели), выделительно- аллергическая (реконвалесценция - 4 неделя заболевания).

Проникшие через рот сальмонеллы попадают в эпителиальные клетки двенадцатиперсной и тонкой кишки посредством эндоцитоза. Они легко проникают в эпителиальные клетки, но не размножаются здесь, а проходят и размножаются в лимфатическом аппарате тонкого кишечника. Сальмонеллы размножаются преимущественно в lamina propria (первичная локализация), что сопровождается местной воспалительной реакцией слизистой оболочки, притоком жидкости в очаг поражения и развитием диарейного синдрома (гастроэнтерит). Энтеротоксины повышают уровень циклического аденомонофосфата (цАМФ), происходит повышение уровня гистамина и других биологически активных веществ, проницаемости сосудов. Наблюдаются водно - электролитные нарушения, развиваются гипоксия и ацидоз, которые усугубляют патологический процесс с преобладанием сосудистых растройств. Происходит разрушение части сальмонелл с выделением эндотоксина, сенсибилизация (ГЗТ) лимфатического аппарата тонкого кишечника.

Из слизистой оболочки сальмонеллы могут попадать в лимфо- и далее в кровоток, вызывая бактеремию. В большинстве случаев она носит транзиторный характер, т.к. сальмонеллы элиминируются фагоцитами.

В отличие от других сальмонелл, возбудители брюшного тифа и паратифов, проникнув в кровоток, способны выживать и размножаться в фагоцитах. Они могут размножаться в мезентериальных лимфоузлах, печени и селезенке и вызывать генерализацию процесса. После гибели фагоцитов сальмонеллы вновь поступают в кровь. При этом Vi- антиген ингибирует бактерицидные факторы.

При гибели сальмонелл освобождается эндотоксин, угнетающий деятельность центральной нервной системы (тиф - от греч. typhos - туман, спутанное сознание) и вызывающий длительную лихорадку. Действие эндотоксина может вызвать миокардит, миокардиодистрофию, инфекционно - токсический шок.

В результате бактеремии происходит генерализованное инфицирование желчного пузыря, почек, печени, костного мозга, твердых мозговых оболочек (вторичная локализация сальмонелл). Происходит вторичная инвазия эпителия кишечника, особенно пейеровых бляшек. В сенсибилизированной сальмонеллами стенке развивается аллергическое воспаление с образованием основного грозного осложнения - брюшнотифозных язв. Наблюдается длительное носительство сальмонелл в желчном пузыре с выделением возбудителя с испражнениями, пиелонефриты, кровотечения и перфорации кишечника при поражении пейеровых бляшек. Затем происходит формирование постинфекционного иммунитета, элиминация возбудителя и заживление язв или формирование бактерионосительства (в Западной Сибири часто на фоне хронического описторхоза).

Возбудителями сальмонеллезов являются другие серотипы сальмонелл, патогенные для человека и животных (S.typhimurium, S.enteritidis, S.heldelberg, S. newport и другие). В основе патогенеза сальмонеллезов - действие самого возбудителя (его взаимодействия с организмом хозяина) и эндотоксина, накапливающегося в пищевых продуктах, инфицированных сальмонеллами. В классическом варианте сальмонеллезная токсикоинфекция - гастроэнтерит. Однако при прорыве лимфатического барьера кишечника могут развиваться генерализованные и внекишечные формы сальмонеллезов (менингит, плеврит, эндокардит, артрит, абсцессы печени и селезенки, пиелонефрит и др.). Увеличение генерализованных и внекишечных форм сальмонеллезов связано с увеличением количества иммунодефицитных состояний, что имеет особое значение при ВИЧ- инфекции.

Отдельную проблему представляют госпитальные штаммы сальмонелл (чаще отдельные фаговары S.typhimurium), вызывающие вспышки внутрибольничных инфекций преимущественно среди новорожденных и ослабленных детей. Они передаются преимущественно контактно- бытовым путем от больных детей и бактерионосителей, обладают высокой инвазивной активностью, часто вызывая бактеремию и сепсис. Эпидемические штаммы характеризуются множественной лекарственной устойчивостью (R- плазмиды), высокой резистентностью, в том числе к действию высоких температур.

Эпидемиологические особенности. Характерно повсеместное распространение. Основные резервуары сальмонелл - человек (возбудители брюшного тифа и паратифа А) и различные животные (остальные серотипы сальмонелл). Основные возбудители отличаются полипатогенностью. Основные источники заражения - мясные и молочные продукты, яйца, птице- и рыбопродукты. Основные пути передачи - пищевой и водный, реже - контактный. Характерна чрезвычайная множественность резервуаров и возможных источников инфекции. Основное значение имеют сельскохозяйственные животные и птицы.

 

 

Методы микробиологический диагностики брюшного тифа, паратифов А и В

План лекции:

1.Морфология          

2.Культивирование

3.Устойчивость        

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

Брюшной тиф – острое антропонозное заболевание с фекально – оральным механизмом передачи, характеризуется поражением лимфатического аппарата тонкой кишки, бактериемией, интоксикацией, розеолезно – папулезной сыпью.

Этиология.

Возбудитель Salmonella typhi относится к роду сальмонелл. Устойчива во внешней среде. В воде может сохраняться до нескольких месяцев. Сохраняется в различных пищевых продуктах, на поверхности овощей, фруктов, предметах обихода. Может размножаться в молоке. Хорошо переносит умеренное охлаждение, но при нагревании до 60 градусов погибает через 3-4 минуты, а при кипячении – почти моментально. Быстро погибает при высушивании и под действием прямых солнечных лучей. Чувствительна к дез средствам.

 

Эпидемиология.

Источник инфекции – больной и бактерионоситель. Возбудитель выделяется во внешнюю среду с калом, мочой, реже со слюной и грудным молоком. Выделение возбудителя происходит с конца инкубационного периода, иногда не прекращается в период реконвалесценции.

Механизм передачи – фекально-оральный.

Пути передачи: водный, пищевой, контактно-бытовой.

Сезонность – летне-осенний период.

Восприимчивость – всеобщая

После перенесенного заболевания – пожизненная невосприимчивость.

 

Клиника.

Инкубационный период от 3 до 25 дней, чаще - 14 дней.

Начальный период начинаться постепенно. С нарастанием симптомов интоксикации. Температура тела повышается медленно ступенеобразно. Период продолжается 4-7 дней и заканчивается, когда температура устанавливается на высоких значениях.

К концу 1-ой недели болезни выявляется бледность кожных покровов, язык обложен серовато-белым налетом, утолщен, с отпечатками зубов по краям, задержка стула.

Период разгара. Температура постоянно держится на высоком уровне. Интоксикация ярко выражена. Больной вялый, адинамичный, заторможенный, иногда негативно настроен к окружающим. При тяжёлом течении развивается тифозный статус: характеризуется галлюцинациями, бредом, нарушением сознания.

На 8-й день в области живота и нижних отделов груди может появиться розеолезная сыпь. Розеолы сохраняются 4-5 дней, а затем исчезают. Брадикардия, АД снижено.

Период угасания: температура снижается литически. Исчезают признаки интоксикации.

Однако могут наступить обострение или рецидив.

Обострения наступают в период ранней реконвалесценции, но еще до нормализации температуры. Рецидивы (возвраты) наступают уже при нормальной температуре и прекратившейся интоксикации.

Предвестники рецидива: длительный субфебрилитет, подсыпание розеол в период реконвалесценции, длительное отсутствие нормализации размеров печени и селезенки.

Характеризуется быстрым нарастанием симптомов и более легким коротким течением.

 

Осложнения.

Осложнения подразделяются на: специфические и неспецифические.

Специфические связаны с развитием болезни: кишечное кровотечение, прободение кишечника.

Неспецифические обусловлены присоединением вторичной инфекции: пневмония, стоматит и другие.

 

Диагностика.

Основывается на клинической картине, эпидемиологических данных, лабораторных исследованиях.

Но современное течение брюшного тифа может быть атипичным. Поэтому есть правило: у всех лихорадящих больных с неустановленным диагнозом и высокой температурой более 5-ти дней берут кровь на бак. исследование.

Кровь на гемокультуру берут 10-15 мл из вены и засевают на желчный бульон.

 

Госпитализация. Особенности ухода.

Обязательная госпитализация в инфекционный стационар.

В течение всего лихорадочного периода и 6-7 дней после нормализации температуры должен соблюдаться строгий постельный режим. С 7-8 дня нормальной температуры разрешается сидеть, с 10-11 дня – ходить.

Уход за кожными покровами, слизистыми оболочками.

Следить за регулярностью стула.

Соблюдение санитарно-гигиенических правил.

Проведение текущей дезинфекции.

 

Лечение.

Диета № 4 и большое количество жидкости.

Рекомендуется легко усвояемая и щадящая пища (стол 4а). Пищу дают небольшими порциями 4-5 раз в сутки. После 12-15 дня нормализации температуры диету расширяют, переходя к общему столу. Но после выписки в течение 10-15 дней нельзя употреблять жирную, соленую, острую пищу.

Этиотропная терапия.

Дезинтоксикационная терапия.

 

Выписка производится после полного клинического выздоровления, но не ранее 21-23-го дня с момента нормализации температуры и после проведения 2-х кратного бактериологического исследования кала, мочи и однократного – дуоденального исследования.

После выписки все реконвалесценты подлежат диспансерному наблюдению с систематическим обследованием (моча,кал,желчь).

 

Паратифы А и Б.

В основном сходны с Брюшным тифом, но имеют свои особенности:

По этиологии: Salmonella paratyphi A

Salmonella paratyphi B

По источнику инфекции: при паратифе А – больной и бактерионоситель

при паратифе Б – больной, бактерионоситель, животные (крупный рогатый скот).

Клинические особенности:

Паратиф А:

Острое начало. Первые признаки: тошнота, рвота, понос. Может сочетаться с катаральными явлениями. Течение тяжелое. Чаще развиваются рецидивы.

Паратиф Б.

Протекает легко или в среднетяжелой форме.

Возбудители пищевых токсикоинфекций и интоксикаций.

 Клостридии ботулизма.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

  1. Общая характеристика и возбудители ПТИ

Пищевые токсикоинфекции (ПТИ) – обширная группа острых кишечных инфекций, развивающихся после употребления в пищу продуктов, инфицированных возбудителями и их токсинами.

Клинически эти болезни характеризуются внезапным началом, сочетанием синдромов интоксикации, гастроэнтерита и частым развитием обезвоживания.

Пищевые токсикоинфекции могут вызываться:

1) сальмонеллами;

2) шигеллами;

3) условно-патогенными микроорганизмами (P. vulgaris, P. mirabilis, энтерококками);

4) энтеротоксическими штаммами стафилококка (St. aureus St. albus);

5) стрептококками (бета-гемолитическими стрептококками группы А);

6) споровыми анаэробами (Clostridium perfringens);

7) споровыми аэробами (Вас. cereus);

8) галофильными вибрионами (Vibrio parahaemolyticus) и др.

Чаще всего они вызываются сальмонеллами и условно-патогенными возбудителями, широко распространенными в окружающей среде. Большинство из них обитает в кишечнике здоровых людей в виде сапрофитов. Для развития заболевания требуется ряд способствующих факторов:

1) достаточная доза возбудителя;

2) соответствующие вирулентность и токсигенность;

3) сниженная сопротивляемость макроорганизма;

4) наличие сопутствующих заболеваний и др.

Возбудители ПТИ способны продуцировать токсины как в пищевых продуктах, так и в организме человека. При разрушении возбудителей в желудочно-кишечном тракте образуются дополнительные порции различного рода токсичных веществ. На массивное попадание в желудочно-кишечный тракт человека возбудителей и токсичных продуктов организм отвечает стереотипной реакцией.

Действие комплекса токсинов обуславливает местные изменения в желудочно-кишечном тракте (воспалительный процесс, извращение моторики), общетоксический синдром (головную боль, гипертермию, нарушение деятельности сердечно-сосудистой и нервной систем и др.).

В целом для этой группы болезней характерны короткий инкубационный период, острое начало и бурное развитие, сочетание признаков поражения желудочно-кишечного тракта и выраженной интоксикации.

Существуют некоторые особенности клинической картины, зависящие от вида возбудителя:

1) сальмонеллезные ПТИ характеризуются тяжелым течением, возможны эпидемические вспышки;

2) при стафилококковой этиологии болезнь развивается наиболее остро после очень короткого инкубационного периода (30–60 мин); начинается с появления тошноты, рвоты, наблюдается сильная режущая боль в животе, напоминающая желудочные колики;

3) при клостридиальной этиологии ПТИ развивается быстро, начавшись появлением интенсивных, колющего характера болей в животе, сопровождается тошнотой, рвотой и жидким кровянистым стулом при нормальной температуре тела;

4) для ПТИ протейной этиологии характерен резкий зловонный запах каловых масс.

Диагностика:

1) бактериологическое исследование выделений больных, пищевых продуктов;

2) серодиагностика.

  1. Ботулизм

Возбудитель ботулизма относится к роду Clistridium, вид Cl. botulinum. Является возбудителем пищевых токсикозов.

Пищевые токсикозы – это заболевания, возникающие при употреблении пищи, содержащей экзотоксины возбудителя, при этом сам возбудитель не играет решающей роли в развитии заболевания.

Cl. botulinum – это грамположительные крупные палочки. Образуют субтерминально расположенные споры. Капсулы не имеют. Строгие анаэробы.

Размножаются на глюкозно-кровяном агаре, образуя неправильной формы колонии с отростками или ровными краями, зоной гемолиза вокруг колоний. При росте в столбике агара напоминают комочки ваты или чечевицу. В жидких средах образуется равномерное помутнение, а затем на дно пробирки выпадает компактный осадок.

Естественной средой обитания клостридий ботулизма является кишечник рыб, животных, микроорганизмы с испражнениями попадают в почву. Способны длительное время сохраняться и размножаться во внешней среде в виде споровых форм. Вегетативные формы малоустойчивы во внешней среде.

Ферментативная активность непостоянна и для идентификации не используется.

По антигенной структуре продуцируемых токсинов различают серовары A, B, C1, D, E, F, Q. Антигенная специфичность самих бактерий не определяется.

Клостридии ботулизма продуцируют самый мощный из экзотоксинов – ботулинический. Ботулинический токсин накапливается в пищевом продукте, размножаясь в нем. Такими продуктами обычно являются консервы домашнего приготовления, сырокопченые колбасы и др.

Токсин обладает нейротропным действием. При развитии заболевания всегда возникает токсинемия, поражается продолговатый мозг и ядра черепно-мозговых нервов. Токсин устойчив к действию пищеварительных ферментов, он быстро всасывается из верхних отделов пищеварительного тракта в кровь и попадает на нервно-мышечные синапсы.

Ботулинический токсин связывается с мембраной синаптосомы, проникает в нервную клетку путем эндоцитоза.

Механизм действия токсина состоит в ингибиции кальцийзависимого освобождения ацетилхолина, блокаде функциональной активности нейрона. В первую очередь поражаются бульбарные нервные центры. Появляются общая интоксикация, признаки поражения органа зрения – двоение в глазах, расстройство аккомодации, расширение зрачков, поражение глазодвигательных мышц. Вместе с тем затрудняется глотание, появляются афония, головная боль, головокружение, рвота.

Заболевание отличается высокой летальностью.

Диагностика:

1) заражение лабораторных мышей; материал – рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, кровь;

2) обнаружение токсина в реакции токсинонейтрализации;

3) серодиагностика.

Лечение: антитоксическая противоботулиническая сыворотка

 

 

                                                Шигеллы.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

     Шигеллы - кишечные патогены человека и приматов, которые вызывают бактериальную дизентерию или шигеллезы. В соответствии с антигенной структурой О- антигена и биохимическими свойствами известные серотипы шигелл разделяют на четыре вида или серогруппы - S.dysenteriae (серогруппа А), S.flexneri (серогруппа В), S.boydii (серогруппа С) и S.sonnei (серогруппа Д).

По морфологическим признакам шигеллы не отличаются от остальных энтеробактерий. Это неподвидные факультативно - анаэробные грамотрицательные палочки.

Биохимические свойства. Шигеллы по сравнению с другими кишечными бактериями биохимически малоактивны. Не образуют сероводород на трехсахарно - железном агаре, не ферментируют мочевину.

Наименьшей ферментативной активностью обладают штаммы S.dysenteriae (серогруппа А), ферментирующие только глюкозу без газообразования, в отличие от других шигелл этот вид является маннит - отрицательным.

Шигеллы Флекснера ферментируют маннит, образуют индол, но не ферментируют лактозу, дульцит и ксилозу. Серотип Ньюкасл разделен на три биохимических типа. Для шигелл Флекснера более характерен водный путь передачи.

Шигеллы Бойда (серогруппа С) имеют близкую биохимическую активность, однако ферментируют дульцит, ксилозу и арабинозу. Имеют ряд серотипов, каждый из которых имеет свой главный типовой антиген.

Шигеллы Зонне (серогруппа Д) способны медленно ферментировать лактозу и сахарозу, имеют биохимические типы и фаготипы. Основной путь передачи - пищевой (чаще через молоко и молочные продукты).

Антигенная структура. У шигелл имеются О- и К- антигены. О- антигены имеют эпитопы различной специфичности - от общих для семейства энтеробактерий до типоспецифических. В классификации учитывают только термостабильные групповые (четыре группы или вида - А,В,С и Д) и типоспецифические (деление на серотипы). К термолабильным антигенам относятся К- антигены (они имеются в группах А и С) и фимбриальные антигены (у шигелл Флекснера они близки в антигенном отношении E.coli). Определение антигенной структуры необходимо для окончательной идентификации.

Эпидемиология. Шигеллы достаточно устойчивы во внешней среде. Источник инфекции - человек с различными формами клинического проявления шигеллезов. Механизм заражения - фекально - оральный. Для различных видов шигелл характерны преобладающие пути передачи (контактно- бытовой - для S.dysenteriae, пищевой - для S.sonnei, водный - для S.flexneri). Для эпидемического процесса характерна изменение структуры циркулирующих популяций возбудителей - смена ведущих видов, биоваров, сероваров, что связано как с изменениями популяционного иммунитета, так и с изменениями свойств возбудителя, особенно с приобретением различных плазмид (R, F, Col и др.). Инфицирующая доза - порядка 200 - 300 шигелл. Более легкое течение имеет дизентерия, вызванная шигеллами Зонне.

Факторы патогенности и патогенез поражений. Главная биологическая характеристика шигелл - способность внедряться в эпителиальные клетки, размножаться в них и вызывать их гибель. Формирование очага в слизистой нисходящего отдела толстого кишечника (сигмовидная и прямая кишки) носит циклический характер: адгезия, колонизация, внедрение шигелл в цитоплазму энтероцитов, размножение, разрушение и отторжение эпителиальных клеток, выход шигелл в просвет кишечника, снова адгезия и т.д.

Роль факторов адгезии и колонизации выполняют пили, белки наружной мембраны, ЛПС, ферменты - нейраминидаза, муциназа, гиалуронидаза (разрушают слизь).

Шигеллы имеют целый ряд факторов инвазии и устойчивости к действию механизмов защиты (К- антиген, ЛПС и др.), контролизуемых хромосомными генами шигелл и плазмидами.

Шигеллы имеют различные токсины. Они имеют эндотоксин и шигаподобные цитотоксины (SLT-1, SLT-2). Цитотоксины обусловливают разрушение клеток, энтеротоксин - диарею, эндотоксин - общую интоксикацию. Токсин Шига вызывает нарушение синтеза белка, всасывания ионов натрия и воды, приток жидкости в очаг воспаления.

Наиболее типичные признаки дизентерии - понос, тенезмы (болезненные спазмы прямой кишки) и частые позывы, общая интоксикация. Характер стула определяется степенью поражения толстого кишечника.

Постинфекционный иммунитет - прочный, типоспецифический.

Лабораторная диагностика. Основной метод диагностики - бактериологический. Производят посев испражнений на дифференциально - диагностические среды Эндо и Плоскирева для получения изолированных колоний. Чистые культуры изучают по биохимическим свойствам, идентификацию проводят в РА с поли- и моновалентными сыворотками. Если выделенная культура обладает биохимическими свойствами шигелл, но не агглютинирует сыворотки к О- антигенам, ее нужно прокипятить 30 минут для разрушения термолабильных К- антигенов, часто препятствующих агглютинации шигелл серогрупп А и С (т.е. имеющих К- антигены), и снова исследовать в РА.

Для серологической диагностики используют РПГА с групповыми эритроцитарными диагностикумами.

 

 

                                        Холерные вибрионы.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

      Возбудителями холеры являются биовар классического холерного вибриона, открытого Р. Кохом в 1883 г., и биовар холерного вибриона Эль-Тор, выделенного из трупа паломника на Синайском полуострове Ф. Готшилхом в 1906 г.

Vibrio cholerae относится к семейству Vibrionaceae, роду Vibrio.

Морфология. Холерные вибрионы имеют форму изогнутой палочки линой 1,5 - 3,0 мкм, толщиной 0,3 мкм ; очень подвижны, обычно монотрихи, не образуют спор и капсул, грамотрицательны.

Под влиянием физических, химических и биологических факторов

холерные вибрионы подвержены изменчивости. На искусственных средах и в старых культурах они могут принимать форму зерен, шаров, колбовидных образований, палочек, нитей, спиралей, образовывать L-формы; при пересеве на свежие среды вибрионы возвращаются к своим исходным формам.

Культивирование. Холерные вибрионы - факультативные анаэробы, хорошо развиваются на средах с рН 7,2 - 8,6, на плотных средах образуют прозрачные, с голубоватым оттенком выпуклые дисковидные колонии с ровными краями. На желатине микроорганизмы образуют прозрачные зернистые колонии которые при исследовании под микроскопом походят на битое стекло. Через 48 часов питательная среда вокруг колоний разжижается и колонии погружаются в зону разжижения.

На щелочном бульоне и пептонной воде через 6 ч роста появляется нежная пленка, состоящая из холерных вибрионов.

Холерные вибрионы изменяются и в культуральном отношении, они диссоциируют из S-формы в R-форму. Этот мутационный процесс сопровождается глубокими изменениями антигенной структуры.

Ферментативные свойства. Холерные вибрионы разжижают свернутую сыворотку, желатин, образуют индол, аммиак, ферментируют с образованием кислоты глюкозу, левулезу, галактозу, мальтозу, сахарозу, маннозу, маннит, крахмал, медленно - глицерин; не ферментируют в первые 48 ч лактозы и арабинозы; молоко свертывают постоянно; обладают лизинорнитин-декарбоксилазной и оксидазной активностью. По способности ферментировать маннозу, арабинозу и сахарозу Б. Хейберг разделил вибрионы на хемовары,. Известно 8 групп вибрионов, холерные вибрионы биовар cholerae и биовар eltor относятся к 1 хемовару.

Гемолитическая активность и гемагглютинирующие свойства холерных вибрионов в отношении различных эритроцитов (барана, козы, кур и др.), а также способность образовывать ацетилметилкарбинол являются нестабильными признаками и учитываются как второстепенные данные в дифференцировке микробов рода Vibrio.

Токсинообразование. Холерные вибрионы продуцируют экзотоксин (холероген), обладающий энтеротоксическим действием и играющий важную роль в патогенезе холеры; сильное токсическое действие оказывает и эндотоксин. Холерные вибрионы образуют фибринолизин, гиалуронидазу, коллагеназу, муциназу, лецитиназу, протеиназы, нейраминидазу.

Антигенная структура. Холерные вибрионы имеют термостабильные О-антигены (соматические) и термолабильные Н-антигены (жгутиковые). О-антиген обладает видовой и типовой специфичностью, Н-антиген является неспецифическим, общим для всего рода Vibrio. Вибрионы разделены на О-подгруппы, которых насчитывается более 40. Холерные вибрионы биовары cholerae и eltor принадлежат к О - 1 подгруппе. Внутри О - 1 подгруппы различают три О-антигена - А, В, С, по комбинации которых выявлены три серовара - Огава (АВ), Инаба (АС) и Гикошима (АВС).

У больных и вибриононосителей обнаружены неагглютинирующиеся формы, природа которых окончательно не установлена. Они могут быть следствием изменчивости холерных вибрионов, которые утрачивают не только агглютинабельность, но и ряд других биологических свойств. Эти формы получили название НАГ-вибрионов. Они сходны с холерными по морфологическим, культуральным и биохимическим признакам, не обладают общими с ними О и Н-антигенами. НАГ-вибрионы довольно часто выделяют из воды и других объектов внешней среды.

Резистентность. Холерные вибрионы длительно сохраняются при низких температурах; в испражнениях выживают до 5 мес, в почве - 2 мес, в устрицах, крабах, креветках, на поверхности рыб и в их кишечнике - от 1 до 40 сут, в воде - несколько суток. Холерный вибрион Эль-Тор обладает большой устойчивостью. Он сохраняется свыше 4 нед в морской и речной воде, 1 - 10 сут на продуктах, 4 - 5 сут в кишечнике мух. Иибрионы Эль-Тор отличаются высокой резистентностью. Он может сохранять жизеспособность более четырех недель в морской и речной воде, 1-10 дней на пищевых продуктах, и 4-5 днях в кишках летят.

Возможно, при благоприятных условиях, холерные вибрионы Эль-Тор могут размножаться в различных водоемах, в иле.

Холерные вибрионы малоустойчивы к действию солнечного света, высушиванию. При температуре 100 °С они погибают мгновенно, при 80°С - в течение 5 мин. Они весьма чувствительны к дезинфицирующим веществам, особенно к кислотам. Так, например, в растворе соляной кислоты 1:10000 они погибают за 1 мин. Холерные вибрионы очень чувствительны к действию желудочного сока.

Патогенность для животных. В естественных условиях животные холерой не болеют. Внутрибрюшинное введение культуры кроликам и морским свинкам сопровождается у них общим токсикозом, перитонитом, который приводит их к гибели.

И. И. Мечников вызвал экспериментальное заболевание, сходное с холерой у человека, у кроликов-сосунков путем заражения их через рот. Р. Кох воспроизводил заболевание у морских свинок с предварительным подщелачиванием желудочного сока и введением им опия. Внутривенное введение вибрионов кроликам и собакам обусловливает у них смертельную интоксикацию.

Патогенез заболевания у человека. Холерные вибрионы передаются от больных и носителей через пищу, воду, мух и грязные руки. Микробы через рот после прохождения кислотного барьера желудка проникают в тонкий кишечник. Благодаря наличию щелочной среды и обилию продуктов белкового распада в кишечнике создаются благоприятные условия для размножения холерных вибрионов и продукции ими сильного энтеротоксина,называемого холерным токсином (холероген).

Холерный токсин состоит из пяти субъединиц В и одной субъединицы А. Субъединица А состоит из двух пептидов, связанных одним дисульфидным мостиком. Субъединица В соединяется с углеводными остатками специфического ганглиозидного рецептора на клетках, выстилающих ворсинки и крипты тонкой кишки. Полагают, что вставка субъединицы В в мембрану клетки хозяина образует гидрофильный трансмембранный канал, через который токсическая субъединца А может проходить в цитоплазму. Холерный энтеротоксин вызывает перенос аденозиндифосфорибозы (АДФ-рибозы) с никотинамидадениндинуклеотида (НАД) на регуляторный белок, который связывается с ферментом аденилатциклазой, ответственным за продукцию внутриклеточного циклического аденозинмонофосфата (цАМФ). В результате происходит необратимая активация аденилатциклазы и гиперпродукция цАМФ. Это в свою очередь вызывает подавление поглощения ионов Na+ и Cl- клетками, покрывающими ворсинки, и гиперсекрецию ионов Cl- и HCO3-. Поэтому всасывание воды, обычно сопровождающееся абсорбцией Na + и Cl-, блокировано и идет пассивный отток воды через клетки слизистой, ведущий к значительно потере воды и электролитов.

Хотя токсин холеры - наиболее важный фактор вирулентности V. cholerae O1, подвижность микрорганизма, а также продукция муциназы и других протеолитических ферментов позволяют ему преодолеть защитный барьер слизистой оболочки и достигать энтероцитов. Как только вибрион проникает через слой слизи, он в состоянии прилипать к поверхности энтероцита с помощью адгезивных гемагглютининов.

Длительность инкубационного периода при холере составляет от нескольких часов до 6 дней (при заболеваниях, вызванных вибрионом Эль-Тор он продолжается 3 - 5 суток). Симптомы заболевания характеризуются общей слабостью, рвотой и частым жидким стулом. Стул похож на рисовый отвар и содержит огромное количество слущенных эпителиальных клеток и холерных вибрионов.

В развитии болезни различают три периода: 1) холерный энтерит (холерный понос или диарея) продолжительностью 1 - 2 сут; у части больных на этом этапе заканчивается инфекционный процесс и наступает выздоровление; 2) холерный гастроэнтерит, при котором обильный понос и многократная рвота приводят к обезвоживанию организма больных, что влечет за собой снижение температуры, уменьшение диуреза, резкое уменьшение минеральных и белковых веществ в крови, появление судорог; испражнения напоминают рисовый отвар; 3) холерный алгид, проявляющийся тяжелыми симптомами: тургор кожи снижен, она собирается в складки; появляется цианоз, голос становится охриплым, иногда наблюдается полная афония; температура тела снижается до 35,5 – 34 °С, развиваются резкое ослабление сердечной деятельности вследствие повышения вязкости крови, задержка мочеиспускания. В ряде случаев развивается холерная кома, приводящая к прострации и смерти.

В тяжелых случаях алгид сопровождается фазой асфиксии, характеризующейся цианозом, диспноэ, уремией, азотемией и бессознательным состоянием (холерная кома), которые ведут к прострации(изнеможению) и смерти. Эффективное лечение и надлежащий уход могут вызвать смену алгидного периода на реактивную стадию, в течение которой мочеиспускание становится нормальным, уменьшается интоксикация, и больной выздоравливает. Фульминантные (быстро протекающие) формы холеры (сухая холера, или cholera sicca) могут встречаться часто. Эти формы характеризуются отсутствием диареи и рвоты и смерть наступает в результате тяжелой интоксикации. Атипичные и скрытые формы холеры наблюдаются часто, особенно у детей, будучи похожими на случаи гастроэнтерита средней тяжести.

Неспецифические осложнения при холере включают пневмонию, рожистое воспаление, флегмоны, абсцессы, иногда сепсис и др. Среди специфиченеских осложнений холеры наиболее угрожающим является холерный тифоид. Он сопровождается повышением температуры тела до 38-39 °C, сыпью на коже, рвотой и частым жидким стулом с неприятным запахом. Это состояние вызывает смерть в 80-90 процентах.

При холере, вызываемой вибрионами Эль-Тор, в 80 - 90% случаев отмечаются стертые и легкие формы. Тяжелые формы с летальным исходом встречаются у лиц с различными соматическими болезнями, снижающими общую резистентность организма и барьерную функцию желудка вследствие гипоацидного гастрита, а также у пожилых людей.

Вскрытие трупа в случае холеры холеры показывает выраженную гиперемию брюшины и серозной оболочки тонкой кишки, которые покрыты густым экссудатом. Слизистая оболочка тонкой кишки застойна, персикового цвета, кишечный эпителий - часто слущен, имеются кровоизлияния в подслизистую. Вибрионы присутствуют в большом изобилии в кишечной стенке, особенно в Либеркюновых железах, и, нередко, в желчном пузыре.

Летальность от холеры в прошлом была высокой (50 - 60%). В связи с применением этиотропной и патогенетической терапии она значительно снизилась. В 1969 - 1971 гг., по данным ВОЗ, она составляла 17,7%.

Иммунитет. У лиц, перенесших холеру, развивается прочный антиинфекционный (антитоксический и антибактериальный) иммунитет, который связан с наличием в крови антител (антитоксинов, лизинов, агглютининов, опсонинов) и нормальных физиологических ингибиторов. Холерные вибрионы быстро лизируются под влиянием иммунных сывороток, содержащих бактериолизины и коимплемент.

И. И. Мечников в иммунитете при холере придавал определенное значение фагоцитозу. В естественном физиологическом механизме защиты большую роль играет нормальная функция желудка, содержимое которого является бактерицидным в отношении холерного вибриона. В эндемических районах возможны реинфекции холеры.

Лабораторная диагностика. В лаборатории устанавливают строгий режим, исследования производят с соблюдением общих правил при работе с особо опасными инфекциями. Для исследования берут испражнения, рвотные массы, органы трупа, воду, предметы, в некоторых случаях - пищевые продукты. Взятие и доставку материала производят с соблюдением определенных правил. Анализ делают по этапам.

  1. Микроскопическое исследование мазков из испражнений, окрашенных по Граму и водным раствором фуксина, в которых у больных обнаруживают холерных вибрионов. Микроскопия в темном поле позволяет получить предваритель-

ный (сигнальный) ответ в течение нескольких минут при условии обследования в ранней стадии.

  1. Посев испражнений больного в 1% пептонную воду, на щелочной мясо-пептонный агар или бактоагар TCBS. Через 6 ч после культивирования при температуре 37°С в пептонной воде наблюдается рост вибрионов в виде нежной пленки, прилипающей к стеклу. Мазки из пленки окрашивают по Граму, выросшую культуру изучают на подвижность, ставят реакцию агглютинации на предметном стекле со специфической агглютинирующей О-сывороткой, разведенной 1:100, затем делают пересев с пептонной воды на плотные среды для выделения чистой культуры. Если в пептонной воде первой генерации вибрионов не обнаружено, то каплю с поверхностного слоя пересевают во вторую пептонную воду. В ряде случаев такими пересевами достигают увеличения микробной массы вибрионов. Выросшую культуру вибрионов на плотных средах (щелочной агар, бактоагар TCBS, среда Монсура и др.) исследуют на подвижность, агглютинабельные свойства и отсевают на скошенный агар для накопления чистой культуры.
  2. Для окончательной идентификации ставят развернутую реакцию агглютинации со специфической O-сывороткой и типоспецифическими сыворотками Огава и Инаба, определяют ферментативные свойства (расщепление маннозы, сахарозы, арабинозы и других углеводов), фаголизабельность

 

 

                                 ПАТОГЕННЫЕ КОККИ

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

СТАФИЛОКОККИ

 Характеристика возбудителя Стафилококки принадлежат к семейству Micrococcaceae, роду Staphylococcus, который в настоящее время включает около 60 видов. С организмом человека экологически связаны 3 основные вида: Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк), Staphylococcus epidermidis (эпидермальный стафилококк) и Staphylococcus saprophyticus (сапрофитный стафилококк). Стафилококки – бактерии шаровидной формы, образующие при делении скопления, похожие на виноградные гроздья, грамположительные, неподвижные, не образуют спор. Некоторые штаммы образуют в макроорганизме нежные капсулы. Капсулообразование in vitro происходит в средах с добавлением плазмы или сыворотки в условиях сниженной аэрации. Стафилококки – факультативные анаэробы, но активнее растут в аэробных условиях, культивируются на простых питательных средах (мясо-пептонном агаре и мясопептонном бульоне). Оптимальная температура 35–400 С, pH среды – 7,0–7,5. Элективными средами для них являются молочно или желточно-солевые агары, так как стафилококки переносят повышенную концентрацию NaCl. На плотных средах образуют колонии правильной круглой формы, окрашенные в оранжевый, лимонно-желтый или белый цвет за счет выработки липохромного фермента. Пигментообразование не является видовым признаком и обусловлено влиянием условий культивирования. Кроме типичных S-форм колоний, стафилококки могут образовывать R,G и L-формы. Колонии в R-форме имеют неправильную форму, шероховатую поверхность, не- 4 ровный край; G-мелкие, карликовые; L-формы представляют собой шаровидные или мелкозернистые образования. При росте на жидких питательных средах стафилококки вызывают равномерное помутнение. Эти микроорганизмы очень активны биохимически. Они обладают большим набором сахаролитических ферментов и разлагают углеводы до кислоты и газа. Расщепляют белки с помощью протеолитических ферментов с выделением сероводорода, восстанавливают нитраты до нитритов. Стафилококки обладают набором факторов патогенности, каждый из которых играет определенную роль в патогенезе вызываемых ими заболеваний. Так, микрокапсула помогает адгезии и защищает бактерии от фагоцитоза. Аналогичную функцию выполняют тейхоевые кислоты клеточной стенки. Развитию воспалительных реакций способствует белок А, который образует только Staphylococcus aureus. Этот белок расположен в клетке поверхностно и связан с пептидогликаном. Он обладает способностью соединяться с участком полипептидной цепи иммуноглобулина, что приводит к нарушению функций комплемента и фагоцитов. Одновременно белок А является аллергеном и обладает антигенными свойствами. Стафилококки продуцируют ряд ферментов агрессии. Среди них – гиалуронидаза, обеспечивающая проникновение в ткани как самих микробов, так и их токсинов; фибринолизин (стафилокиназа), активирующий фибринолитическую активность плазмы; протеиназы, разрушающие белки; лецитиназа и другие. Как один из важнейших дифференциально-диагностических признаков стафилококков рассматривается продуцирование ими плазмокоагулазы. Способность вызывать свертывание плазмы является одним из важнейших критериев патогенности этих бактерий. В случаях, когда штамм не продуцирует плазмокоагулазу, для подтверждения его патогенности определяется ДНК-азная активность. Стафилококки выделяют большое количество раз- 5 нообразных токсинов. Среди них: лейкоцидин, действующий на лейкоциты и макрофаги; гемолизины (альфа, бета, гамма, дельта), разрушающие эритроциты человека и различных видов животных. Обнаружен дермотоксин, воздействие которого приводит к омертвлению (некрозу) ткани. Эксфолиативные токсины (А и В) вызывают заболевания, при которых происходит внутриэпидермальная отслойка эпителия кожи. Некоторые штаммы золотистого стафилококка – возбудители «синдрома токсического шока» – вырабатывают сильнейший токсин ТSST-1 (токсин синдрома токсического шока). Стафилококки, вызывающие пищевые отравления, продуцируют энтеротоксины 6 типов (A, B, C, D, E, F). Стафилококки имеют сложную антигенную структуру. Известно более 50 антигенов, к которым в организме образуются антитела. Ряд из них одновременно является и аллергенами. Установлено, что антигенными свойствами обладают: тейхоевая кислота, пептидогликаны клеточной стенки, капсула, белок А и так называемый «хлопьеобразующий фактор». Антигены подразделяют на родо-, видо- и типоспецифические. У стафилококков известно более 30 серовариантов, отличающихся по типоспецифическим антигенам, но в лабораторной практике в настоящее время серотипирование не нашло широкого применения. Существует большое количество стафилококковых фагов, которые постоянно используют для определения фаготипа выделенного стафилококка. Типирование St. aureus проводится с применением международного набора из 23 умеренных фагов, разделенного на 4 группы. Есть набор и для типирования St. epidermidis. Стафилококки отличаются от других неспорообразующих микроорганизмов достаточно высокой устойчивостью к факторам внешней среды. Они переносят воздействие прямых солнечных лучей в течение нескольких часов, сохраняют не только жизнеспособность, но и патогенность и ви- 6 рулентность в течение месяцев в сухой пыли. На стенах и стеклах в помещениях стафилококки могут выживать в течение 3 лет. Выдерживают 30-минутное нагревание до 80˚С. Пониженная температура, повторное замораживание и оттаивание также не вызывают гибель стафилококков. Воздействие дезинфектантов на эти микроорганизмы различно и зависит от их химического состава и концентрации. Эпидемиология, патогенез, клинические проявления, иммунитет Стафилококки широко распространены в окружающей среде – почве, воде, воздухе, на коже и слизистых оболочках, в протоках сальных и потовых желез человека и животных. Среди них есть патогенные, сапрофитные и условнопатогенные штаммы. Источник инфекции – больные люди или здоровые носители. Среди них выделяют постоянных (резидентных) носителей, у которых выявляют постоянно один и тот же фаговар стафилококка, и временных (перемежающихся), выделяющих микроорганизм периодически. Особую опасность для медицинских учреждений и коллективов представляют носители патогенных стафилококков. В некоторых случаях источником инфекции могут быть животные. Заболевания носят характер либо аутоинфекции, когда возбудитель проникает при повреждениях кожи или слизистых оболочек в другие биотопы организма, либо экзогенной инфекции при разных способах заражения. Пути передачи при различных заболеваниях стафилококковой этиологии разнообразны: контактно-бытовой, воздушно-капельный, воздушно-пылевой, алиментарный. Отмечается также множество механизмов и факторов передачи возбудителя. Патогенез стафилококковых инфекций обусловлен многочисленными токсинами и ферментами, способствующими проникновению микробов в организм хозяина и нару- 7 шающих функции органов и тканей, а также состоянием аллергии, осложняющей течение заболеваний. Среди заболеваний, вызываемых стафилококками, известно более 200 нозологических форм. Наиболее часто встречаются поражения: кожи и подкожной клетчатки (пиодермия, дерматиты, фурункулез, абсцессы и др.); стафилококковый сепсис; поражения органов кровообращения и дыхания (эндокардит, перикардит, ангина, пневмония и др.); костно-мышечной и соединительной ткани (артриты, остеомиелит); мочеполовой системы (цистит, уретрит, пиелит и др.). Стафилококки вызывают также конъюктивит, отит. Штаммы, продуцирующие энтеротоксин, являются причиной пищевых отравлений, возникающих чаще при употреблении кондитерских изделий с кремом, молочных и мясных продуктов и др. Заболевания, вызванные стафилококками, проявляются обычно в виде гнойно-воспалительных процессов различной локализации и степени тяжести. При пищевых отравлениях у больных наблюдаются тошнота, рвота, диарея. Иммунитет после перенесенного заболевания характеризуется слабой напряженностью и кратковременностью. Характерно даже повышение восприимчивости, наступающей после перенесенных стафилококковых инфекций. Иммунитет обусловлен фагоцитозом, образованием антител (антитоксинов, антимикробных). Перекрестный иммунитет отсутствует. Микробиологическая диагностика В зависимости от клинических проявлений исследуемым материалом при диагностике стафилококковых инфекций могут служить: гной, слизь из зева, носа, раневое отделяемое, кровь, моча, мокрота, испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка. Основной метод диагностики – бактериологический. Материал засевают на МПА, молочно- 8 солевой, кровяной или желточно-солевой агар. Выделенную чистую культуру идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим и биологическим свойствам. Особое внимание обращают на гемолиз, сбраживание маннита в анаэробных условиях, плазмокоагулазную активность. У коагулазоотрицательных штаммов выявляют наличие фермента ДНК-азы – пробу для подтверждения их патогенности. Для выбора наиболее эффективных лечебных препаратов определяют чувствительность выделенных культур стафилококков к антибиотикам. Проводят фаготипирование с целью выявления источника заболевания, что особенно необходимо при внутрибольничных инфекциях. При пищевых отравлениях серологическим методом устанавливают тип энтеротоксина и ставят биопробу, вводя фильтрат бульонной культуры стафилококка кошкам. Лечение и профилактика Для лечения стафилококковых инфекций применяют антибиотики, в первую очередь полусинтетические пенициллины, поскольку многие штаммы микроорганизма способны вырабатывать бета-лактамазы. Выбор антибиотика необходимо делать с учетом результатов антибиограммы. При хронических и тяжелых заболеваниях используются также аутовакцины, антистафилококковый человеческий иммуноглобулин, антистафилококковая донорская гипериммунная плазма и антифагин (заменяет аутовакцину, так как включает 12 наиболее часто встречающихся штаммов патогенных стафилококков). С целью профилактики применяют стафилококковый анатоксин. Такая профилактика проводится хирургическим больным и беременным женщинам.

 СТРЕПТОКОККИ

Стрептококки представляют собой обширную группу грамположительных микроорганизмов шаровидной формы, объединяющую облигатных патогенов человека, условнопатогенных микроорганизмов и сапрофитов. Содержание Г+Ц в ДНК нуклеоида 33–42 мол%. Из всех известных к настоящему времени видов стрептококка (более 20 видов) наибольший медицинский интерес представляют стрептококки вида Streptococcos pyogenes (S. pion – гной, genos – род, рождать), вызывающие тяжелые инфекционные процессы и имеющие повсеместное распространение. Характеристика возбудителя Патогенные стрептококки имеют сферическую или овоидную форму диаметром 0,5–2,0 мкм и располагаются в виде цепочек клинических штаммов обнаружена капсула. Поверхность стрептококка покрыта множественными фимбриями, которые состоят из М-протеина, липотейхоевых кислот, R- и T-белков и других белков-рецепторов, являющихся важными антигенами. Патогенные стрептококки относятся к хемоорганотрофам. Факультативные анаэробы. В зависимости от роста на кровяном агаре стрептококки классифицируют (М. Браун, 1919) следующим образом: • β-гемолитические, дающие полный лизис эритроцитов вокруг колоний; • α-зеленящие стрептококки с зеленовато-серым или коричневым ореолом вокруг колоний, в котором гемоглобин эритроцитов преобразован в метгемоглобин; 10 • негемолитические (γ-гемолитические) – отсутствует видимый лизис эритроцитов. При расщеплении сахаров (глюкозы, мальтозы, лактозы, маннита, сахарозы, салицина, трегалозы) образуются только кислоты без газообразования. Стрептококки не ферментируют инулин (полимер фруктозы), крахмал, гиппурат, свертывают молоко, не разжижают желатин, не восстанавливают нитраты в нитриты, растворяют фибрин, не лизируются в желчесодержащих средах. Каталазо- и оксидазоотрицательны. Стрептококки обладают значительной устойчивостью к физическим и химическим воздействиям внешней среды. Так, при температуре 560 С гибель стрептококков наступает через 30 мин., при температуре 600 С они разрушаются через 15 мин. Дезинфицирующие средства (фенол, йод, спирт и др.) в общепринятых концентрациях убивают их через 15– 20 мин. В мокроте и других экскрементах, в сухих каплях крови выживают в течение нескольких месяцев. Патогенные стрептококки чувствительны практически ко всем антибиотикам кроме аминогликозидов. Особого внимания заслуживает высокая чувствительность стрептококков на протяжении многих десятилетий к бензилпенициллину. Антибиотики могут нарушать у них синтез пептидогликана, что приводит к формированию L-форм стрептококков. Эти формы могут длительно персистировать в макроорганизме, вызывая патологические изменения и иммунонологические сдвиги. Антигенная структура S. pyogenes довольно сложна. Впервые классификация стрептококков, основанная на различиях антигенной структуры, была создана Р. Лендсфильд (1933 г.). Ею установлена групповая специфичность полисахарида С (субстанция С) клеточной стенки стрептококков в реакции кольцепреципитации с преципитирующими антисыворотками. На основании различий этого полисахарида выделено 20 серогрупп стрептококка, которые обозначены 11 большими буквами латинского алфавита от А до Н и от К до V. S. pyogenes относится к группе А по Лендсфильд. По специфичности М-протеина стрептококки внутри группы разделяются на 100 серологических типов, которые обозначаются цифрами. Их определяют в реакциях агглютинации или преципитации с типоспецифическими сыворотками. Антитела к М-протеину формируют типоспецифический иммунитет, обеспечивающий длительную невосприимчивость к повторному инфицированию. Стрептококки группы А вырабатывают более 20 внеклеточных веществ, обладающих антигенной активностью (стрептокиназа, ДНКаза, гиалуронидаза, протеазы и др.) и имеющих важное значение в патогенезе стрептококковых инфекций. Особого внимания заслуживают перекрестно-реагирующие антигены стрептококка, общие с антигенами тканей человека – клеток базального слоя кожи, синовиальной ткани суставов, соединительной ткани, базальной мембраны почек и др., что сопровождается длительной персистенцией паразита в макроорганизме и отменой толерантности к аутоантигенам (мимикрия возбудителя). К перекрестно-реагирующим антигенам стрептококка группы А относят полисахарид С клеточной стенки, протеины клеточной стенки, гиалуроновую кислоту, капсулы и др. Взаимодействие таких перекрестно-реагирующих антигенов с образующимися антителами и активация комплементарного каскада лежат в основе патогенетических механизмов в развитии ревматического артрита, васкулита, ревматизма, гломерулонефрита и других иммунопатологических состояний. Факторы патогенности стрептококка многочисленны и многообразны, что обеспечивает ему способность вызывать различные по локализации и тяжести течения патологические процессы (таблица). Они проявляются в его адгезивных свойствах, способности к интенсивной колонизации 12 эпителиальных тканей, антифагоцитарной активности, выделении ряда экстрацеллюлярных продуктов. Адгезивными свойствами обладают расположенные на поверхности клеточной стенки стрептококка протеин М, липотейхоевые кислоты и ряд других поверхностных элементов.

 

 

 

МЕНИНГОКОККИ

Характеристика возбудителя Neisseria meningitidis – грамотрицательные диплококки, имеют форму зерен кофе, обращенных друг к другу вогнутыми сторонами. Свежевыделенные штаммы имеют капсулу. Размер клеток 0,6–1,0 мкм в диаметре. Неподвижны, спор не образуют. Имеют пили, выполняющие функцию адгезинов. Аэробы. Менингококки культивируют на питательных средах с добавлением крови, сыворотки при рН 7,2–7,4 и температуре 30–37˚С. Повышенные концентрация СО2 и влажность стимулируют рост этих бактерий. Колонии круглые, бесцветные, маслянистой консистенции диаметром 0,5–1,5 мм. На кровяном МПА гемолиза эритроцитов не вызывают. Ферментативная активность слабая. Расщепляют глюкозу и мальтозу с образованием кислоты, не разлагают белки, не восстанавливают нитраты, обладают цитохромоксидазной и каталазной активностью Антигенный состав менингококков сложный. Основное значение имеют полисахариды капсул, на основании которых выделяют 14 серологических групп (А, В, С,… 135W, 20 X, Y, Z). Представители серогруппы А вызывают эпидемические вспышки. На основании различий белков наружной мембраны выделяют до  серотипов у менингококков групп В, С, Y, 135W. У представителей серогруппы А отмечен монотиповой белковый спектр. Их делят на субтипы (клоны) на основании различий в структуре ДНК (известно более 10 клонов). К основным факторам патогенности относят: • пили, как фактор адгезии бактерий на поверхности чувствительных клеток; • гиалуронидазу – фермент распространения; • эндотоскин, являющийся липоолигосахаридом (ЛОС) клеточной стенки. Оказывает пирогенное действие, вызывает появление геморрагий. От его количества зависит тяжесть течения заболевания; • капсула обеспечивает инвазивность и устойчивость к фагоцитозу. Менингококки очень неустойчивы во внешней среде: при высыхании быстро погибают, нагревание до 80˚С убивает их в течение 1–2 мин, кипячение – мгновенно. Под действием дезинфицирующих растворов (3–5% раствор карболовой кислоты, 0,5–1,0% хлорамина и др.) они гибнут в течение первой минуты. Эпидемиология, патогенез, клинические проявления, иммунитет Менингококковая инфекция является строгим антропонозом. В естественных условиях ни один вид животных не восприимчив к менингококкам. Источниками инфекции являются больные генерализованными формами, или назофарингитом, и здоровые носители менингококков. Путь передачи инфекции – воздушно-капельный. Входными воротами инфекции являются слизистые оболочки носоглотки, где  возникает экссудативный назофарингит или носительство. Отсюда гематогенным путем менингококки разносятся по организму, вызывая менингит или менингококкцемию (сепсис), часто имеющие крайне тяжелое течение. Летальность при таких формах составляет 1,7–9,0%. Наибольшее количество заболеваний регистрируется у детей в возрасте от 6 месяцев до 2 лет. Постинфекционный иммунитет при генерализованных формах болезни гуморальный стойкий, напряженный, носит строго группоспецифический характер. Менингококконосительство рассматривается как естественная иммунизация «живой» вакциной. Новорожденные дети получают пассивный естественный иммунитет трансплацентарно от матери, который защищает их в течение 2–6 месяцев.

ГОНОКОККИ

    Характеристика возбудителя Гонококки являются грамотрицательными диплококками, в типичных случаях имеют форму зерен кофе, вогнутыми сторонами обращены друг к другу. Имеют нежную капсулу и пили. Неподвижны, спор не образуют. Размер кокков 0,6–0,8х1,25–1,6 мкм. Для них характерен полиморфизм. Описаны диплококки с неодинаковыми по величине половинками, крупные, шаровидной формы, с вакуолями, сотовидные, мозаичные, нитевидные, очень мелкие пылевидные, L-формы и др., которые могут возникать под влиянием лекарственных препаратов и других факторов. У гонококков обнаружено несколько плазмид, среди них R-плазмиды, одна из которых несет ген продукции βлактамазы, что обеспечивает им устойчивость к пенициллинам. Гонококки не размножаются на простых питательных средах, хорошо растут на средах с добавлением нативного белка (крови, сыворотки, асцитической жидкости и др.) и ви- 23 таминов, при рН 7,2–7,4. Оптимальная температура культивирования 36–37˚С. Аэроб, но отмечен более обильный рост во влажной камере в атмосфере с 5–7% CO2. При росте в жидких средах образуется нежная пленка на поверхности, а бульон остается прозрачным. На агаровых средах образуются нежные, выпуклые, круглые, блестящие, не пигментированные, почти прозрачные колонии размером 0,5–0,7 мм. Гонококки в ферментативном отношении малоактивны. Разлагают глюкозу с образованием кислых продуктов без газа. Оксидазо- и каталазоположительны. Протеолитической активностью не обладают. Гемолизин не выделяют. Антигенная структура гонококков неоднородна и легко изменяется под действием различных факторов. Различают следующие наиболее важные в антигенном отношении субстанции: – липоолигосахариды (ЛОС) клеточной стенки, которые обеспечивают видовую антигенную специфичность и проявляют сильные иммуногенные свойства; – антигены пилей, обладающие генетической вариабельностью, относятся к типовым антигенам; – комплекс белков наружной мембраны, различие которых позволяет выделить 16 антигенных серотипов гонококков. Капсула также обладает антигенными и иммуногенными свойствами. Факторы патогенности гонококков представлены: – адгезинами, функцию которых выполняют пили и фактор прилипания (протеин мутности – «ора»-протеин – от англ. opacity – мутность). Последний вместе с пориновым белком PorB обеспечивает инвазивные свойства гонококков, способствуя инвагинации его в эпителиальные клетки путем фагоцитоза; – антифагоцитарными свойствами капсулы, маскирующей антигенные детерминанты клеточной стенки; 24 – эндотоксином, высвобождающимся при гибели гонококков и являющимся ЛПС клеточной стенки; – синтезом протеазы, разрушающей Ig A на поверхности слизистых оболочек. Устойчивость к факторам внешней среды у гонококка очень низкая. При повышении температуры до 50°С гибель наступает через несколько минут, при 100°С – мгновенно. Гонококки не переносят высыхания, охлаждения, действия прямого солнечного света. Во влажной среде могут сохранять жизнеспособность до суток. Дезинфицирующие вещества в обычных рабочих концентрациях вызывают их быструю гибель. Высокую чувствительность проявляют к антибиотикам пенициллинового ряда (за исключением штаммов с R-плазмидами), цефалоспоринам, фторхинолонам, макролидам. Гонококки естественно устойчивы к ристомицину, линкомицину, ванкомицину, полимиксину. Патогенность для животных. Гонококки в естественных и даже экспериментальных условиях не способны вызывать типичное заболевание у животных. Эпидемиология, патогенез и клинические проявления, иммунитет Гонококки являются возбудителями венерического заболевания только человека, передающегося главным образом половым путем и проявляющегося острым или хроническим гнойным воспалением мочеполовых органов. Болезнь известна под названием гонорея со времен выдающегося римского врача Галена (II в. н.э.). Внеполовой путь передачи возможен, но встречается крайне редко (инфицирование через общую постель, губки, полотенца и др.). Возможно заражение новорожденных во время родов от инфицированной матери с развитием острого воспаления конъюнктивы и роговой оболочки глаз – бленнореи. Восприимчивость людей к гонококковой инфекции чрезвычайно высока. Гонореей чаще болеют мужчины, чем женщины, это соотношение составляет 2:1. Наиболее высокий уровень заболеваемости приходится на летне-осенние месяцы. На возникновение, распространение и течение гонореи большое влияние оказывают социальные факторы: уровень культуры и морали, материальное благосостояние, крепость семейных уз, половое воспитание и пр. Входными воротами инфекции является цилиндрический эпителий уретры, шейки матки, конъюнктивы и прямой кишки. Прикрепившись к ворсинкам эпителия, гонококки проникают внутрь клеток путем эндоцитоза. В них образуются гигантские эндосомы, внутри которых гонококки активно размножаются, оставаясь недоступными действию антител, фагоцитов, антибиотиков. После инкубационного периода (2–4 дня) происходит гибель и слущивание эпителиальных клеток, нарушается процесс самоочищения слизистых оболочек. Развивается воспалительный процесс с обильной миграцией лейкоцитов, которые фагоцитируют гонококки, но не способны их переварить (незавершенный фагоцитоз). Заболевание проявляется обильными гнойными выделениями из мочеиспускательного канала, что сопровождается резями и болями при мочеиспускании. Из места внедрения гонококки проникают в субэпителиальные ткани и различные отдаленные отделы мочеполового тракта, а также в кровь, с последующим диссеминированием и развитием артритов, эндокардита или гонококковой септицемии (очень редко). В настоящее время различают гонорею мочеполовых органов (генитальную), экстрагенитальную (конъюнктивиты, проктиты и др.) и метастатическую. По давности заболевания выделяют свежую (до 2 мес.) и хроническую гонорею (свыше 2 мес.). Иммунитет. После перенесенной гонококковой инфекции не формируется невосприимчивость к повторному заражению. Возможны повторные неоднократные заражения (ре- и суперинфекция). Образующиеся в процессе болезни антитела не обладают протективными свойствами. Течение заболевания сопровождается развитием инфекционной аллергии, и обычно через 5–7 дней от начала болезни становится положительной внутрикожная проба с гонококковым антигеном.

 

 

Возбудители раневых анаэробных инфекций.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

     Анаэробная инфекция — болезнь, вызываемая облигатными анаэробными бактериями в условиях, благоприятствующих жизнедеятельности этих мик­робов. Анаэробы могут поражать любые органы и ткани. Облигатные анаэробы разделяются на две группы: 1) бактерии, образующие споры (клостридии) и 2) неспорообразующие или так называемые неклостридиальные анаэробы. Первые вызывают клостридиозы, вторые — гнойно-воспалитель­ные заболевания различной локализации. Представители обеих групп бактерий относятся к условно-патогенным микробам.

Газовая гангрена — раневая инфекция, вызываемая бактериями рода Clostridium, характеризуется бы­стро наступающим некро­зом преимущественно мышечной ткани, тяжелой интоксикацией и отсутствием выраженных воспа­лительных явлений.

Таксономия. Возбудители — несколько видов рода Clostridium, отдел Firmicutes. Основными представителями являются C.perfringens, C.novii, C.ramosum, C.septicum и др. Первое место по частоте встречаемости и тяжести вызываемого заболевания занимает C.perfringens.

Морфологические и культуральные свойства. Палочковидные, грамположительные бактерии, образующие споры. В пораженных тка­нях клостридии газовой гангрены формируют капсулы, облада­ющие антифагоцитарной активностью, при попадании в окру­жающую среду образуют споры.

Биохимические свойства. Обладают вы­сокой ферментативной активностью, расщепляют углеводы с образованием кислоты и газа; проявляют гистолитическую ак­тивность.

Антигенные свойства и токсинообразование. Каждый вид клостридии разделяется на серовары, продуциру­ющие экзотоксины и различающиеся по антигенным свойствам. Например, токсин С. perfringens подразделяется на 6 сероваров: А, В, С, D, Е и F. Из них патогенными для человека являются А и F, остальные патогенны для животных. С. novii по анти­генным свойствам токсина разделяются на серовары А, В, С и D. Некоторые токсины обладают свойствами ферментов.

Факторы патогенности: Клостридии газовой гангрены образуют экзотоксин — а-токсин, являющийся лецитиназой, а также гемолизины, коллагеназу, гиалуронидазу и ДНКазу. Экзотоксины специфичны для каждого вида клостридий.

Резистентность. Чувствительны к кислороду, солнечному свету, высокой температуре, дезинфектантам. Возбудители газовой гангрены, являясь нормальными обита­телями кишечника животных и человека, с фекалиями попа­дают в почву, где споры длительное время сохраняются. В не­которых почвах клостридии могут размножаться.

Эпидемиология. При тяжелых травмах и несвоевременной хирургичес­кой обработке ран. В эпидемиологии газовой гангрены большое значение имеет загрязнение ран почвой.

Патогенез. Возникновению газовой гангрены способствует ряд условий: попадание микробов в рану (заболевание обычно вызывается ассоциацией нескольких видов анаэробов и реже одним из них), наличие некротических тканей, снижение резистентности. В некротических тканях анаэробы часто находят условия гипоксии, благоприятные для их размно­жения. Образуемые ими токсины и ферменты приводят к по­вреждению здоровых тканей и тяжелой общей интоксикации организма; а-токсин, лецитиназа, расщепляет лецитин — важ­ный компонент клеточных мембран. Выделяемые гиалуронидаза и коллагеназа увеличивают проницаемость тканей, а также способствуют распространению микроба в окружающей ткани.

Клиника. Инкубационный период короткий — 1—3 дня. Отеки, газо­образованием в ране, выраженной интоксикацией организма. Течение болезни усугубляют сопутствующие бактерии.

Иммунитет. Перенесенная инфекция не оставляет имму­нитета. Ведущая роль в защите от токсина принадлежит анти­токсинам.

Микробиологическая диагностика. Материал для исследования (кусочки пораженных тканей, раневое отделяемое) микроскопируют. Диагноз подтверждается при обнаружении грам «+» палочек в материале в отсутствии лейкоцитов. Проводят бактериологическое исследование – обнаружение С.perfringens в факалиях – пищевая токсикоинфекция;

Лечение. Хирургическое: удаляют некротические ткани. Вводят антитоксические сыворотки, применяют антибиотики и гипербарическую оксигенацию.

Антитоксические сыворотки - в жидком и сухом виде после очистки методом ферментативного гидролиза анатоксических сывороток, полученных при иммунизации лошадей анатоксинами. Применяют для экстренной профилактики и специфич. терапии.

Профилактика. Хирур­гическая обработка ран, соблюдение асептики и антисептики при операциях. Для специфической активной иммунизации применяют анатоксин в составе секстанатоксина , создающий приобретенный, искусственный, активный, антитоксический иммунитет.

Ботулизм — острое инфекционное заболевание, ха­рактеризующееся интоксикацией организма с пре­имущественным поражением центральной нервной системы. Болезнь возникает в результате употреб­ления пищевых продуктов, содержащих токсины Clostridium botulinum.

Таксономия. Возбудитель ботулизма относится к отделу Firmicutes, роду Clostridium.

Морфологические и тинкториальные свойства. C.botulinum — грамположительные палочки с закругленными концами, образуют споры и имеют вид веретена. Капсулой не обладают, перитрихи.

Культуральные свойства. Строгий анаэроб. Оптимальными для его роста являются температура 30С. На кровяном агаре образует небольшие прозрачные колонии. В столбике сахарного агара можно обнаружить R-формы формы зерен чечевицы и S-формы – пушинок.

Биохимическая активность. Выделяют 4 группы: бактерии I группы – выраженные протеолитические свойства, гидролизуют желатину, ферментируют глк. и мальтозу; II группы – проявляют сахаролитическую активность, протеолитической – нет. III группа – проявляют липазную активность, гидролизуют желатину. VI – гидролизуют желатину, не проявляют сахаролитических свойств.

Все типы образуют желатиназу, лецитиназу, H2S.Бактерии типа А,В,Е,F – ферментируют глк., фруктозу, мальтозу, сахарозу. Типа С,D – глк, мальтозу.

Антигенные свойства. Имеются группоспецифические жгутиковые – Н и типоспецифические О-АГ бактерий ,не проявляющие токсических свойств. По структуре экзотоксинов бактерии разделяют на 8 сероваров: А, В, С1,С2, D, E, F и G.

Факторы патогенности. Выделяет экзоток­син, самый сильный из всех биологических ядов. Ботулинический эк­зотоксин обладает нейротоксическим действием. Его особенностью является высокая устойчивость к нагреванию (сохраняется в течение 10—15 мин при 100 °С), к кислой среде, высоким концентрациям поваренной соли, замораживанию, пищевари­тельным ферментам.

 

 

                        Условно-патогенные бактерии.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

Клебсиеллы

Род Klebsiella включает в себя несколько патогенных для человека видов. Наиболее значимы K. pneumoniae, K. ozaenae, K. rhinoscleromatis.

Это грамотрицательные палочки средней величины, не образующие спор. Факультативные анаэробы. В препаратах располагаются поодиночке, попарно или короткими цепочками. Не имеют жгутиков, неподвижны. Спор не образуют.

Это истинно-капсульные бактерии: образуют капсулу в организме и на питательных средах. Капсула имеет полисахаридную структуру.

Нетребовательны к питательным средам. На плотных питательных средах образуют характерные куполообразные мутные слизистые колонии. При росте на мясопептонном бульоне вызывают равномерное помутнение, иногда со слизистой пленкой на поверхности.

Клебсиеллы устойчивы к факторам внешней среды, благодаря капсуле длительно сохраняются в воде, на предметах, в помещениях.

Обладают выраженной сахаролитической активностью, ферментируют углеводы с образованием кислоты и газа. По биохимическим свойствам род делится на шесть видов. Для дифференциации используют следующие тесты:

1) ферментацию глюкозы;

2) ферментацию лактозы;

3) образование уреазы;

4) утилизацию цитрата.

Антигенная структура:

1) соматический О-антиген – группоспецифический;

2) капсульный К-антиген.

К-антигены является общими с антигенами эшерихий и сальмонелл.

Факторы патогенности:

1) обладают выраженными адгезивными свойствами;

2) главный фактор – капсула, защищающая микроорганизмы от фагоцитоза;

3) имеют К-антиген, подавляющий фагоцитоз;

4) выделяют эндотоксин.

Клебсиеллы нередко обнаруживаются на коже и слизистых оболочках, в связи с чем возможно развитие эндогенной инфекции. Но экзогенное заражение встречается чаще. Источниками инфекции могут быть больной, бактерионоситель, объекты внешней среды. Пути передачи – воздушно-капельный, контактно-бытовой.

  1. pneumoniae может вызывать у человека пневмонию, поражение суставов, мозговых оболочек, мочеполовых органов, гнойные послеоперационные осложнения, сепсис.
  2. ozaenae поражает слизистую оболочку верхних дыхательных путей и придаточных пазух носа, вызывая их атрофию.
  3. rhinoscleromatis поражает слизистую оболочку носа, трахею, бронхи, глотку, гортань.

Постинфекционный иммунитет нестойкий.

Диагностика:

1) бактериологическое исследование; материал – отделяемое пораженных слизистых оболочек;

2) иммуноиндикация.

Этиотропная терапия:

1) антибиотики, фторхинолоны с учетом чувствительности возбудителя;

2) убитая лечебная вакцина Солко-Уровак (для лечения урогенитальных инфекций);

3) вакцина ВП-4 (для лечения инфекций дыхательных путей).

Специфическая профилактика: вакцина IRS19.

 

Протей

Род Proteus. Возбудителем гнойно-воспалительных заболеваний является вид P. mirabilis.

Это полиморфные грамотрицательные палочки с закругленными концами, факультативные анаэробы. Капсулообразование отсутствует. Имеют перитрихиально расположенные жгутики.

Н-формы этих бактерий отличаются высокой подвижностью, хотя встречаются и неподвижные (О-формы).

Нетребовательны к питательным средам. На мясопептонном агаре Н-форма протея дает характерный ползучий рост в виде нежной вуали голубовато-дымчатого цвета (феномен роения), затягивающий всю поверхность сплошным налетом без образования отдельных колоний. В жидкой питательной среде дает рост в виде диффузного помутнения. При культивировании характерен гнилостный запах.

О-формы образуют крупные с ровными краями колонии. Некоторые штаммы вызывают гемолиз эритроцитов в кровяных средах.

В окружающей среде устойчивы, могут сохранять жизнеспособность в слабых растворах дезинфектантов. Широко распространены в природе. Являются обитателями кишечника человека и животных.

Биохимические свойства:

1) ферментируют глюкозу до кислоты;

2) не разлагают маннит и лактозу;

3) продуцируют сероводород;

4) разжижают желатин, расщепляют мочевину с образованием аммиака;

5) обладают протеолитической и пептолитической активностью.

Антигенное строение:

1) соматический О-антиген – группоспецифический;

2) жгутиковый Н-антиген – вариантспецифический.

По Н-антигену протеи делят на 110 сероваров. Внутри вида различают фаговары, бактерициновары, бактериоциногеновары.

Факторы патогенности:

1) адгезины – пили;

2) эндотоксин;

3) патогенные амины – индол, скатол;

4) ферменты агрессии – протеазы.

Протеи в небольших количествах могут обнаруживаться в кишечнике здорового человека, поэтому протейная инфекции может развиваться как эндогенная.

Основным местом их обитания являются объекты внешней среды, гниющие продукты, сточные воды, почва. Источниками инфекции для человека могут быть больной и бактерионоситель.

Бактерии участвуют в развитии гнойно-воспалительных заболеваний мочевыводящих путей, быстро распространяются по ожоговой поверхности, давая характерный гнилостный запах.

Постинфекционный иммунитет нестойкий.

Диагностика: основной метод – бактериологическое исследование; материал определяется локализацией очага поражения. Посев по методу Шушкевича в каплю конденсированной влаги свежескошенного мясопептонного агара; характерен рост в виде вуали по всей поверхности среды.

Этиотропная терапия:

1) антибиотики, нитрофураны, фторхинолоны;

2) протейный или колипротейный бактериофаг;

3) убитая лечебная стафило-протейно-синегнойная вакцина.

Специфическая профилактика не разработана.

 

 

                             Бордетеллы коклюша и паракоклюша.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

    Коклюш – острое инфекционное заболевание с воздушно-капельным путем передачи, характеризуется приступами спазматического кашля. Наблюдается преимущественно у детей раннего и дошкольного возраста.

Этиология. Возбудитель коклюша – мелкая, грамотрицательная, гемолитическая, неподвижная, малоустойчивая во внешней среде палочка. Возбудитель быстро погибает под действием высокой температуры, при воздействии прямых солнечный лучей и дезинфектантов. Сохраняет чувствительность к антибиотикам (макролидам, цефалоспоринам, левомицетину). Экзотоксин вызывает гибель и отторжение эпителия верхних дыхательных путей. Он воздействует на дыхательный и сосудодвигательный центры головного мозга, на стенки сосудов и приводит к выраженным нарушениям внутриклеточного метаболизма, гипоксии.

Патогенез. Входные ворота инфекции – верхние дыхательные пути, где и вегетирует коклюшная палочка. Образуемый ею токсин обусловливает раздражение слизистой оболочки дыхательных путей и оказывает общее действие главным образом на нервную систему, в результате чего развивается спастический компонент (спастическое состояние диафрагмы и других дыхательных мышц, бронхоспазм, склонность к спазму периферических сосудов), а у маленьких детей – иногда клонико-тонические судороги скелетных мышц. При тяжелых формах возникает гипоксия. В патогенезе коклюша определенную роль играют аллергические механизмы.

Эпидемиология. Передача воздушно-капельным путем, источники инфекции больной человек и бактерионоситель. Выделяются следующие периоды болезни:

1) инкубационный (скрытый) период – от 3 до 14 дней;

2) катаральный (продромальный, или предсудорожный) – 7—10 дней;

3) период разгара болезни (период судорожного кашля) – 3—6 недель;

4) период выздоровления (период остаточных явлений) – 2—3 недели.

Клиника. Инкубационный период – 5—20 дней. Катаральный период характеризуется небольшим или умеренным повышением температуры тела, нечастым сухим кашлем. Этот период продолжается от нескольких дней до 2 недель. Переход в спастический период происходит постепенно. Появляются приступы спастического кашля, характеризующиеся серией коротких кашлевых толчков, быстро следующих друг за другом, чередующихся с последующим свистящим шумным вдохом, который сопровождается протяжным звуком (реприз). Во время приступа лицо больного краснеет, синеет, набухают вены шеи, лица. Больной вытягивает голову вперед и высовывает язык. Возникает новая серия кашлевых толчков. Это может повторяться несколько раз. Приступ заканчивается выделением небольшого количества вязкой светлой мокроты, нередко наблюдается рвота, в тяжелых случаях – кратковременная остановка дыхания (апноэ). Приступы в зависимости от тяжести болезни повторяются до 20—30 раз в день и более. Лицо больного становится одутловатым, на коже и конъюнктиве глаз иногда появляются кровоизлияния, на уздечке языка образуется язвочка. Тяжелое течение на высоте приступа приводит к клоническим или клонико-тоническим судорогам, а у новорожденных детей – к остановке дыхания. Этот период продолжается 1—5 недель и более. В периоде разрешения, продолжающемся 1—3 недели, кашель теряет конвульсивный характер, постепенно исчезают все симптомы.

Классификация. В зависимости от частоты кашлевых приступов и выраженности прочих симптомов различают легкую, среднетяжелую и тяжелую формы коклюша. Различают типичные и атипичные (стертые, бессимптомные, транзиторное бактерионосительство) формы коклюша, при которых спастический характер кашля не выражен. Эти форма наблюдается у детей, получивших вакцинопрофилактику, и у взрослых.

Осложнения. Пневмонии, ателектазы легких, эмфизема легких, средостения и подкожной клетчатки, энцефалопатии, кровотечения из носа, бронхов, а также кровоизлияния под кожу, склеру, сетчатку, головной мозг.

Дифференциальный диагноз проводится с ОРЗ, бронхитами, аспирацией инородного тела, ларингоспазмом.

Диагностика. На основании анамнеза, клинических и лабораторных данных в анализе крови выявляется лейкоцитоз, лимфоцитоз, СОЭ при отсутствии осложнений нормальная или пониженная. Подтверждением диагноза служит выделение коклюшной палочки из трахеобронхиального секрета, для ретроспективного диагноза в более поздние периоды используют серологические методы (реакция агглютинации, РСК, РНГА). При рентгенологическом обследовании больных наблюдают горизонтальное положение ребер, повышенную прозрачность легочных полей, утолщение купола диафрагмы и низкое ее расположение, усиление легочного рисунка, появление сетчатости.

Лечение проводится на дому. Госпитализируют детей до 1 года и с тяжелыми формами болезни, при наличии осложнений и по эпидемиологическим показаниям. Режим – щадящий с длительным пребыванием больного на свежем воздухе. Диета – по возрасту. Этиотропная антибактериальная терапия проводится макролидами, пенициллинами, аминогликозидами в течение 7 дней. На ранних стадиях болезни эффективен противококлюшный гамма-глобулин (по 3—6 мл ежедневно 3 дня подряд). При тяжелых и осложненных формах коклюша применяют преднизолон. С целью ослабления спастических явлений и кашлевых приступов назначают нейролептические, противосудорожные, седативные противокашлевые средства и препараты, разжижающие мокроту. При гипоксии показана оксигенотерапия, при апноэ – длительная искусственная вентиляция легких. В случае затянувшейся репарации назначают стимулирующую терапию (переливание плазмы, инъекции иммуноглобулина, физиотерапевтические процедуры, витамины).

Прогноз. Для детей первого года жизни, особенно при развитии осложнений, коклюш остается опасным заболеванием. Прогноз ухудшается при наличии сопутствующих заболеваний.

Профилактика. Иммунопрофилактика с помощью АКДС-вакцины в возрасте 3 месяцев трехкратно с интервалом 1,5 месяца. У детей первых лет жизни при контакте с больным рекомендуют специфический гамма-глобулин (по 3 мл двукратно с интервалом в 1 день). Изоляция больного продолжается 30 дней с начала болезни. На детей до 7-летнего возраста, бывших в контакте с больным, ранее не болевших коклюшем и непривитых, накладывается карантин сроком на 14 дней с момента изоляции больного. Если изоляция не проведена, этот срок удлиняется до 25 дней со дня заболевания. Заключительная дезинфекция не производится.

 

 

                                  Коринебактерии дифтерии.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

     Дифтерия — острая инфекционная болезнь, харак­теризующаяся фибринозным воспалением в зеве, гортани, реже в других органах и явлениями ин­токсикации. Возбудителем ее является Corynebacterium diphtheriae.

Таксономия. Corynebacterium относится к отделу Firmicutes, роду Corynebacterium.

Морфологические и тинкториальные свойства. Возбудитель дифтерии характеризуется полиморфизмом: тонкие, слегка изогнутые палочки (наиб. распространенные) встречаются кокковидные и вет­вящиеся формы. Бактерии нередко располагаются под углом друг к другу. Они не образуют спор, не имеют жгутиков, у многих штаммов выявляют микрокапсулу. Характерная особенность - наличие на концах палочки зерен волютина (обусловливает булавовидную форму). Возбудитель дифтерии по Граму окрашивается положи­тельно.

Культуральные свойства. Факульта­тивный анаэроб, оптим. темпе­ратура. Микроб растет на специальных питатель­ных средах, например на среде Клауберга (кровяно-теллуритовый агар), на которой дифтерийная палочка даёт колонии 3 типов: а) крупные, серые, с неровными краями, радиальной исчерченностью, напоминающие маргаритки; б) мелкие, чер­ные, выпуклые, с ровными краями; в) похожие на первые и вторые.

В зависимости от культуральных и ферментативных свойств различают 3 биологических варианта C.diphtheriae: gravis, mitis и промежуточный intermedius.

Ферментативная ак­тивность. Высокая. Ферментируют глк и мальтозу в образованием кислоты, не разлагают сахарозу, лактозу и маннит. Не продуцируют уреазу и не образуют индол. Продуцирует фермент цистиназу, рпсщепляющую цистеин до H2S. Образует каталазу, сукцинатдегидрогеназу.

Антигенные свой­ства. О-антигены – термостабильные полисахаридные, расположены в глубине клеточной стенки. К-антигены – поверхностные, термолабильные, сероватоспецифические. С помошью сывороток к К-антигену С.diph. разделяют на серовары(58).

Факторы патогенности. Экзотоксин, нарушающий синтез белка и пора­жающий в связи с этим клетки миокарда, надпочечников, почек, нервных ганглиев. Способность вырабатывать экзотоксин обус­ловлена наличием в клетке профага, несущего tох-ген, ответ­ственный за образование токсина. Фер­менты агрессии — гиалуронидазу, нейраминидазу. К фак­торам патогенности относится также микрокапсула.

Резистентность. Устойчив к высушиванию, действию низких температур, поэто­му в течение нескольких дней может сохраняться на предметах, в воде.

Эпидемиология. Источник дифтерии — больные люди Заражение происходит чаще через дыхательные пути. Основной путь передачи воздушно-капельный, возможен и контактный путь — через белье, посуду.

Патогенез. Входные ворота инфекции — слизистые обо­лочки зева, носа, дыхательных путей, глаз, половых органов, раневая поверхность. На месте входных ворот наблюдается фибринозное воспаление, образуется характерная пленка, кото­рая с трудом отделяется от подлежащих тканей. Бактерии вы­деляют экзотоксин, попадающий в кровь, — развивается токсинемия. Токсин поражает миокард, почки, надпочечники, нервную систему.

Клиника. Существуют различные по локализации формы дифтерии: дифтерия зева, которая наблюдается в 85—90 % случаев, дифтерия носа, гортани, глаз, наружных половых ор­ганов, кожи, ран. Инкубационный период составляет от 2 до 10 дней. Заболевание начинается с повышения температуры тела, боли при глотании, появления пленки на миндалинах, увеличения лимфатических узлов. Отека гортани, разви­вается дифтерийный круп, который может привести к асфик­сии и смерти. Другими тяжелыми осложнениями, которые так­же могут явиться причиной смерти, являются токсический миокардит, паралич дыхательных мышц.

Иммунитет. После заболевания - стойкий, напряженный антитоксичный иммунитет. Особое значение – образование АТ к фрагменту В. Они нейтрализуют дифтерийный гистотоксин, предупреждая прикрепление последнего к клетке. Антибактериальный иммунитет – ненажняженный, сероватоспецифичен

Микробиологическая диагностика. С помощью тампона у больного берут пленку и слизь из зева и носа. Для постановки предварительного диагноза возможно применение бактериоскопического метода. Основной метод диагностики — бактериологический: посев на среду Клаубера II (кровяно-теллуритовый агар), на плотную сывороточную среду для выявления продукции цистиназы, на среды Гисса, на среду для определения токсигенности возбудителя. Внутривидовая идентификация заключается в определении био- и серовара. Для ускоренного обнаружения дифтерийного токсина применяют: РНГА(реакция непрямой геммаглютинации) с антительным эритроцитарным диагностикумом , реакцию нейтрализации антител (о наличии токсина судят по эффекту предотвращения гемаггютинации); РИА (радиоиммунный) и ИФА(имунноферментный анализ).

Лечение. Основной метод терапии — немедленное введение специфической антитоксической противодифтерийной лошадиной жидкой сыворотки. Иммуноглобулин человека противодифтерийный для в/в введения.

Ассоциированные вакцины: АКДС (абсорбированная коклюшно – столбнячная вакцина), АДС(абсорбированный дифтерийно - столбнячный анатоксин).

 

 

                                       Микобактерии туберкулеза.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

    Туберкулез—хроническое заболевание человека, сопровождающееся поражением органов дыхания, лимфатичес­ких узлов, кишечника, костей и суставов, глаз, кожи, почек и мочевыводящих путей, половых органов, центральной нервной системы.

Болезнь вызывается 3 видами микобактерий: Mycobacterium tuberculosis — человеческий вид, Mycobacterium bovis — бычий вид, Mycobacterium africanum — промежуточный вид.

Таксономия. отдел Firmicutes, род Mycobacterium. Родовой признак — кислото, спирто- и щелочеустойчивость.

Морфология, тинкториальные и культуральные свойства. Выражен­ный полиморфизм. Они имеют форму длинных, тонких (М.tuberculosis) или коротких, толстых (M.bovis), прямых или слегка изогнутых палочек с гомогенной или зернистой цитоплазмой; грамположительны, неподвижны, спор не образуют, имеют микрокапсулу. Для их выявления применяют окраску по Цилю—Нильсену. Микобактерии могут образовывать различ­ные морфовары (L-формы бак­терий), которые длительно персистируют в организме и индуцируют противотуберкулезный иммунитет.

Возбудители туберкулеза характеризуются медленным ростом, требовательны к питательным средам. М.tuberculosis относятся к аэробам, глицеринзависимы. На жидких питательных средах дают рост в виде сухой пленки кремового цвета. При внутриклеточном развитии, а также при росте на жидких средах выявляется характерный корд-фактор, благодаря которому микобактерии растут в виде «жгутов». На плотных средах рост в виде кремового, сухого чешуйчатого налета с неровными краями (R-формы). По мере роста колонии приоб­ретают бородавчатый вид. Под влиянием антибактериальных средств возбудители изменяют культуральные свойства, образуя гладкие колонии (S-формы). M.bovis —растут на средах медленнее, чем M.tuberculosis, пируватзависимы; на плотных питательных средах образуют мелкие шаровидные, серовато-белые колонии (S-формы).

Ферментная активность. Высокая каталазная и пероксидазная активность. Каталаза термолабильна. М.tuberculosis в большом количестве синтезирует ниацин (никотиновая кислота), который накапливается в культуральной среде и определяется в пробе Конно.

Химический состав: Основными химическими компо­нентами микобактерии являются белки, углеводы и липиды. Липиды (фосфатиды, корд-фактор, туберкулостеариновая кислота) - обусловливают устойчивость к кислотам, спиртам и щелочам, препятствуют фагоцитозу, на­рушают проницаемость лизосом, вызывают развитие специфи­ческих гранулем, разрушают митохондрии клеток. Микобактерии индуцируют развитие реакции гиперчувствительности IV типа (туберкулин).

Факторы патогенности: основные патогенные свойства обусловлены прямым или иммунологически опосредованным действием липидов и липидсодержащих структур.

Антигенная структура: В ходе забо­левания к антигенам образуются антипротеиновые, антифосфатидные и антиполисахаридные антитела, свидетельствующие об активности процесса.

Резистентность. Наличие липидов - устойчивы к действию небла­гоприятных факторов. Высушивание мало влияет. Погибают при кипячении.

Эпидемиология. Основной источник инфек­ции — человек, больной туберкулезом органов дыхания, выделяющий микробы в окружающую среду с мокротой. Основные пути передачи инфекции — воздушно-капельный и воздушно-пылевой.

Патогенез и клиника. Возникновению заболевания способствуют различные иммунодефициты. Инкубационный период составляет от 3—8 нед. до 1 года и более. В развитии болезни выделяют первичный, диссеминированный и вторичный туберкулез, который является результатом эндогенной реактивации старых очагов. В зоне проникновения микобак­терий возникает первичный туберкулезный комплекс, со­стоящий из воспалительного очага, пораженных регионарных лимфатичес­ких узлов и измененных лимфатических сосудов между ними. Диссеминация микробов может происходить бронхо-, лимфо- и гематогенно. В основе специфического воспаления при туберкулезе лежит реакция гиперчувствительности IV типа, что препятствует рас­пространению микробов по организму.

Различают 3 клинические формы: первичная туберкулезная интоксикация у детей и подростков, туберкулез органов дыха­ния, туберкулез других органов и систем. Основными симптомами легочного туберкулеза являются субфебрильная температура тела, кашель с мокротой, кровохар­канье, одышка.

 Иммунитет. Противотуберкулезный иммунитет нестериль­ный инфекционный, обусловлен наличием в организме L-форм микобактерий.

Микробиологическая диагностика. Диагностику проводят с помощью бактериоскопии, бактериологического исследования и постановки биологической пробы. Все методы направлены на обнаружение микобактерий в патологическом материале: мокроте, промывных водах бронхов, плевральной и церебральной жидкостях, кусочках тканей из органов.

К обязательным методам обследования относится бактериоскопическое, бактериологическое исследование, биологическая проба, туберкулинодиагностика, основанная на определении повышен­ной чувствительности организма к туберкулину. Чаще для вы­явления инфицирования и аллергических реакций ставят внутрикожную пробу Манту с очищенным туберкулином в стандартном разведе­нии. Для экспресс-диагностики туберкулеза применяют РИФ(реакция иммунофлюоресенции) и ПЦР(полимеразная цепная реакция)Для массового обследования населения, раннего выявле­ния активных форм туберкулеза можно использовать ИФА(иммуноферментный анализ), на­правленный на обнаружение специфических антител.

Лечение. По степени эффективности противотуберкулезные препараты делят на группы: группа А — изониазид, рифампицин; группа В — пиразинамид, стрептомицин, флоримицин; группа С – ПАСК, тиоацетозон. При наличии сопутствую­щей микрофлоры и множественной лекарственной устойчивости микобактерий применяют фторхинолоны и альдозон.

Профилактика. Специфическую профилактику проводят путем введения живой вакцины — BCG(БЦЖ), внутрикожно на 2—5-й день после рождения ребенка. Проводят последующие ревакцина­ции. Предва­рительно ставят пробу Манту для выявления туберкулиннегативных лиц, подлежащих ревакцинации

 

                                      

 

ВИЧ инфекция.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

Структура

ВИЧ относится к семейству ретровирусов.

Вирион имеет сферическую форму, диаметром 100–150 нм. Кубический тип симметрии. Наружная (суперкапсидная) оболочка вируса состоит из бимолекулярного слоя липидов, который имеет происхождение из клеточной мембраны клетки хозяина. Из нее выступают шипы двух типов:

1) gp 120 (обладает рецепторной функцией);

2) gp 41 (обладает якорной функцией).

В эту мембрану встроены рецепторные образования. Под наружной оболочкой располагается сердцевина вируса (кор), которая имеет форму усеченного конуса. Промежуток между наружной вирусной мембраной и сердцевиной вируса заполнен матриксным белком. Внутри сердцевины располагаются две одинаковые молекулы вирусной РНК, связанные с низкомолекулярными белками р6 и р7.

Каждая молекула РНК содержит девять генов ВИЧ:

1) структурные (три гена);

2) регуляторные (три гена, они не кодируют структурных компонентов вируса, но, попав в клетку, кодируют образование веществ, которые либо угнетают активность структурных генов, либо активируют);

3) дополнительные (три гена, они содержат информацию, необходимую для продукции белков, которые управляют способностью вируса инфицировать клетку, реплицироваться и вызывать заболевание).

Выделяют три группы структурных генов:

1) gag (кодируют образование структурных белков сердцевины вируса);

2) pol (направляют синтез белков – вирусных ферментов);

3) ent (кодируют синтез оболочечных белков gp 120 и gp 41).

Концы каждой молекулы РНК содержат дублированную последовательность РНК. Эти участки действуют как переключатели для управления процессом вирусной транскрипции, взаимодействуя с белками ВИЧ или белками клетки хозяина.

Кроме РНК, там же находятся вирусные ферменты:

1) обратная транскриптаза; осуществляет синтез вирусной ДНК с молекулы вирусной РНК;

2) протеаза; участвует в «нарезании» предшественников вирусных белков при созревании новой вирусной частицы;

3) эндонуклеаза (интеграза); производит встраивание вирусной ДНК в геном клетки хозяина, в результате чего образуется провирус.

Антигенными свойствами обладают:

1) белки сердцевины;

2) оболочечные гликопротеины. Характеризуются высоким уровнем антигенной изменчивости, который определяется высокой скоростью замен нуклеотидов.

Интенсивная антигенная изменчивость ВИЧ происходит в организме больных в ходе инфекции и у вирусоносителей. Она дает возможность вирусу «скрыться» от специфических антител и факторов клеточного иммунитета, что приводит к хронизации инфекции.

В обычных культурах клеток ВИЧ не культивируется. Для культивирования используется культура Т-лимфоцитов с хелперной функцией.

  1. Патогенез и иммунологические нарушения

В организме вирусы взаимодействуют с СD—4 рецепторами, которые располагаются на поверхности иммунокомпетентных клеток – лимфоцитов, макрофагов. Взаимодействие вируса с клеткой-мишенью включает в себя четыре стадии:

1) адсорбцию к СD—4 рецепторам;

2) прокол клетки и эндоцитоз;

3) депротеинизацию с участием протеинкиназ клетки хозяина;

4) синтез ДНК на матрице РНК с участием обратной транскриптазы.

ДНК вируса включается в геном клетки, затем происходит синтез вирусных компонентов – белков, затем – самосборка вириона и его отпочкование, в ходе которого вирус приобретает суперкапсид.

Взаимодействие вируса с клеткой может быть различным:

1) вирус может персистировать в клетке, ничем себя не проявляя, у него может отсутствовать синтез нуклеиновых кислот и белков;

2) медленное размножение и отпочкование вируса и инфицирование новых клеток;

3) быстрое размножение вируса в клетке, гибель ее и выход вируса.

Инфекция начинается с внедрения вируса в организм человека. Патогенез ВИЧ-инфекции включает в себя пять основных периодов:

1) инкубационный период продолжается от инфицирования до появления антител и составляет от 7 до 90 дней. Вирус размножается экспотенциально. Никаких симптомов не наблюдается. Человек становится заразным через неделю;

2) стадия первичных проявлений характеризуется взрывообразным размножением вируса в различных клетках, содержащих СD-4 рецептор. В этот период начинается сероконверсия. Клинически эта стадия напоминает любую острую инфекцию: наблюдаются головная боль, лихорадка, утомляемость, может быть диарея, единственным настораживающим симптомом является увеличение шейных и подмышечных лимфоузлов. Эта стадия продолжается 2–4 недели;

3) латентный период. В этот период вирус замедляет свою репликацию и переходит в состояние персистенции. Латентный период длится 5—10 лет. Единственным клиническим симптомом является лимфаденопатия – увеличение практически всех лимфоузлов. Уменьшается количество Т-хелперов по отношению к Т-супрессорам, исчезают реакции гиперчувствительности замедленного типа;

4) СПИД-ассоциированный комплекс (пре-СПИД). Вирус начинает интенсивно размножаться во всех тканях и органах, взрывообразно реплицироваться с повреждением клеток. Наиболее сильно повреждаются Т-хелперы, происходит полная их деструкция, что приводит к дерегуляции всей иммунной системы, резко снижается иммунитет (как гуморальный, так и клеточный);

5) собственно СПИД. Наблюдается полное отсутствие иммунного ответа. Длительность – примерно 1–2 года, непосредственной причиной смерти являются вторичные инфекции.

  1. Эпидемиология. Диагностика. Лечение

Источниками вируса являются больные и вирусоносители.

Пути передачи вируса:

1) заражение при половом контакте;

2) парентеральное заражение кровью при гемотрансфузиях, медицинских манипуляциях, операциях;

3) передача новорожденным через плаценту, в родовых путях, при грудном вскармливании.

Возможно заражение в парикмахерских, при пользовании зубными щетками, нанесении татуировок.

ВИЧ присутствует у больного человека во всех клетках, где есть СD-4 рецепторы – это Т-хелперы, тканевые макрофаги, в клетках кишечника, слизистых и т. д. У инфицированного человека вирус выделяется со всеми биологическими жидкостями: максимальное количество его находится в крови и в семенной жидкости. Среднее количество вируса – в лимфе, ликворе, отделяемом влагалища. Еще меньше вируса в молоке кормящей матери, слюне, слезах, поте. Содержание вируса в них таково, что этого недостаточно, чтобы вызвать инфекцию.

Основные группы риска – наркоманы, пациенты с гемофилией, гомосексуалисты, проститутки.

ВИЧ характеризуется низкой устойчивостью к воздействию физических и химических факторов. Нагревание при 560 °C в течение 30 мин приводит к снижению инфекционного титра вируса в 100 раз, а более высокие температуры быстро и полностью инактивируют вирус. Чувствителен к действию детергентов и дезинфектантов. ВИЧ устойчив к высушиванию. Его инфекционность сохраняется в течение 4–6 дней при комнатной температуре. Малочувствителен к действию УФ-излучения.

Лабораторная диагностика:

1) скрининг антител против ВИЧ с помощью иммуноферментного анализа (от начала второго периода и до смерти инфицированного). Если реакция положительная, ставится повторная с другой сывороткой и на более совершенной системе. Затем проводится иммуноблодинг;

2) диагностикум ВИЧ-2 (при подозрении на ВИЧ-инфекцию и при отрицательных реакциях на ВИЧ-1);

3) заражение культур Т-хелперов. Вирус обнаруживают по цитопатическому действию, в серологических реакциях, по обратной транскриптазной активности;

4) гибридизационные тесты с использованием вирусоспецифических нуклеиновых зондов.

Лечение:

1) этиотропная терапия. Используют следующие препараты:

а) азидотимизин (инактивирует обратную транскриптазу вируса);

б) a-интерферон (удлиняет латентный период, подавляя репликацию);

2) иммуностимуляция: вводят интерлейкин-2, интерфероны и иммуноглобулины;

3) лечение опухолей, вторичных инфекций и инвазий.

Специфическая профилактика не разработана. Проводится испытание генно-инженерной вакцины, содержащей поверхностные гликопротеины вирусов.

 

 

           Особо опасные инфекции. (Иерсинии чумы, Франсиселлы туляремии)

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

Иерсинии чумы.

Возбудитель чумы относится к роду Yersinia, вид Y. pestis.

Это грамотрицательные полиморфные мелкие палочки с закругленными концами. Они неподвижны. Спор не образуют. В организме больного и при размножении на питательных средах образуют капсулу. В окрашенных метиленовым синим мазках выявляется биполярность.

Являются факультативными анаэробами. Размножаются на простых питательных средах, но лучше при добавлении гемолизированной крови. Оптимальная температура для культивирования – 28 °C.

Иерсинии чумы хорошо переносят низкие температуры, могут длительно сохранять жизнеспособность в окружающей среде и в организме человека и животных.

Чувствительны к УФ-облучению, высушиванию, действию высоких температур.

Биохимическая активность: расщепляют углеводы с образованием кислоты, слабая протеолитическая активность – желатин не разжижают, молоко не свертывают.

Антигены палочки чумы:

1) О-антиген (соматический, локализуется в клеточной стенке);

2) F-антиген (поверхностный белковый термостабильный антиген);

3) V– и W-антигены (обладают антифагоцитарной активностью).

Факторы патогенности:

1) наличие антигенов, обладающих антифагоцитарной активностью;

2) образование пестицинов;

3) способность ассимилировать гемин и синтезировать пурины;

4) способность продуцировать токсин («мышиный яд» – блокирует действие ряда метаболитов и гормонов).

Основными хозяевами иерсиний чумы в природе являются грызуны (суслики, тарбаганы и др.). Заражение человека происходит трансмиссивным (переносчики – блохи), контактным и алиментарным путями. Больные легочной формой чумы заражают окружающих аэрогенным путем.

Клинические проявления чумы зависят от входных ворот инфекции. Различают следующие формы заболевания:

1) кожно-бубонную;

2) первично-легочную;

3) вторично-легочную;

4) первично-септическую;

5) вторично-септическую.

Основное место размножения возбудителя – лимфатические узлы. Недостаточная барьерная функция лимфоузлов приводит к развитию первично-септической формы чумы.

Вторично-септическая форма развивается на фоне бубонной или легочной форм.

После перенесенного заболевания остается прочный продолжительный иммунитет.

Чума – особо опасная инфекция. Работа с материалами, содержащими возбудитель болезни, проводится в специальных лабораториях, подготовленным персоналом, при соблюдении установленных мер безопасности.

Диагностика:

1) бактериологическое исследование. Материалы – гной из бубонов, отделяемое язвы, мокрота. Посевы подвергаются холодовому обогащению;

2) серодиагностика – РПГА;

3) реакции иммуноиндикации.

Лечение: проводится антибиотикотерапия стрептомицином, противочумным иммуноглобулином.

Специфическая профилактика: живая или химическая чумная вакцина; создается стойкий иммунитет на 6 месяцев.

 

Франциселла туляремии

    Названы в честь Е. Франциса. Второе название дано по наименованию района Туляре в США, где в 1912 г. был выделен возбудитель туляремии - Francisella tularensis. К данному роду относится большое количество бактерий, патогенность которых для человека не установлена.

Морфология и физиология. F. tularensis представляют собой мелкие грамотрицательные коккобактерии, не образующие ни спор, ни жгутиков. Окружены мало выраженной капсулой. Аэробы, требовательные к питательному субстрату. Культивируют на питательных средах, содержащих цистеин, яичный желток, либо на кровяном агаре с цистеином и глюкозой. Бактерии туляремии образуют небольшие колонии беловатого цвета. На жидких средах растут на поверхности среды. Ферментируют глюкозу, мальтозу и другие сахара с образованием кислоты. Некоторые штаммы ферментируют глицерин, что используется для дифференциации этих бактерий.

Антигены. Содержат Vi-антигены и О-антигены, связанные с клеточной стенкой.

Патогенность и патогенез. Факторы вирулентности у франциселл туляремии примерно такие же, как и у ряда других грамотрицательных бактерий, в частности бруцелл. Адгезия происходит на эпителиальных клетках респираторного и кишечного трактов за счет капсулы и белков наружной мембраны клеточной стенки. Они обладают высокой инвазивностью, о чем свидетельствует их способность проникать в организм через неповрежденную кожу и слизистые оболочки глаз, носоглотки, гортани, пищеварительного тракта. Далее они проникают в лимфоциты региональных лимфоузлов, где размножаются и попадают в кровяное русло, вызывая состояние бактериемии. Токсичность этих бактерий связана с освобождением эндотоксина (ЛПС) при их разрушении.

Иммунитет. При туляремии наблюдается клеточный и гуморальный иммунный ответ. Первый приводит к развитию ГЗТ, которая появляется в начале заболевания и сохраняется в течение многих лет. Антитела обусловливают напряженный гуморальный иммунитет.

Экология и эпидемиология. Туляремия - природно-очаговая зоонозная инфекция. Естественные хозяева возбудителя туляремии - грызуны (водяные крысы (ондатры), полевки, домовые мыши и др.). Туляремия зарегистрирована у многих видов диких животных. Заражение людей происходит при прямом контакте с больными животными и их трупами, а также через объекты внешней среды (вода, пищевые продукты и др.),инфицированные грызунами. В воде и зараженных продуктах возбудитель сохраняет свою жизнеспособность в течение длительного срока. Возможно заражение трансмиссивным путем при укусах кровососущими членистоногими (комары, клещи, слепни).

Лабораторная диагностика. Наиболее распространенный метод - постановка кожноаллергической пробы с тулярином, полученным из бактерий туляремии. Бактериологическое исследование проводится только в режимных лабораториях из-за опасности самозаражения.

Профилактика и лечение. Специфическая профилактика туляремии проводилась живой вакциной Гайского-Эльберта, получение которой явилось в свое время большим достижением советских ученых. Для лечения применяют антибиотики широкого спектра действия.

 

 

                                     Патогенные спирохеты.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

   Спирохеты (лат. spira – виток, греч. chaite – гребень, грива) отличаются от бактерий и грибов строением в виде штопорообразной извитой формы. Размеры их колеблются в больших пределах (ширина 0,3 - 1,5 мкм и длина 7 - 500 мкм).

   Спирохеты – тонкие одноклеточные изогнутые или спиральные палочки. с рядом отличительных ультраструктурных особенностей, используемых в дифференцировании родов. Цитоплазма окружена цитоплазматической мембраной, пептидогликановый слой обеспечивает ригидность клетки и ее форму.

Нуклеоид спирохет не отделен от цитоплазмы ядерной мембраной. При электронной микроскопии обнаруживается нежная цитоплазматическая мембрана, в которой заключается цитоплазма. У спирохет нет клеточной стенки, характерной для бактерий, но при электронной микроскопии выявлено, что они имеют тонкую клеточную стенку (перипласт), который прилагает к цитоплазме. Спирохеты не образуют спор и капсул.

По Романовскому - Гимзе одни виды окрашиваются в синий, другие - в сине-фиолетовый, третьи - в розовый цвет. Хорошим методом обработки спирохет является серебрение. Тинкториальные свойства используют для дифференциации сапрофитов и патогенных спирохет.

В порядок Spirochaetales, семейство Spirochaetaceae входят сапрофиты и патогенные виды. К сапрофитам относятся Spirochaeta и Cristispira, представляющие собой крупные клетки размером 200 - 500 мкм; некоторые имеют крипты (волнистый гребни), концы их заострены или тупые; они обитают на мертвых субстратах, в загрязненных водоемах, в кишечнике холоднокровных животных. По Романовскому - Гимзе окрашиваются в синий цвет.

К патогенным относятся три рода: Treponema, Leptospira, Borrelia.

У трепонем видны тонкие цитоплазматические нити в бактериальной цитоплазме, в то время как у боррелий они отсутствуют. Представители обоих родов обладают активной подвижностью, у них несколько жгутиков присоединены к каждому полюсу клетки и обернуты вокруг бактериального тела клетки. В отличие от других подвижных бактерий, эти жгутики не выступают в окружающую среду, а находятся под наружной оболочкой бактерии. Жгутики трепонем сложно устроены и состоят из влагалища и сердцевины, в то время как жгутики у боррелий более просты и подобны жгутикам других бактерий. Наружная оболочка спирохет богата липидами, и, по крайней мере у некоторых трепонем, содержит мало белков и липополисахаридов. Это может объяснять чувствительность этих микроорганизмов к губительному действию детергентов и высушивания.

Хотя трепонемы относятся к грам-отрицательным микроорганизмам, они не окрашиваются по методу Грама, и при их исследовании используют специальные методы окраски. Кроме того, патогенные трепонемы не могут хорошо культивироваться на питательных средах, их поддерживают путем пассажа на чувствительных животных. В отличие от них, боррелии окрашиваются грам-отрицательно и многие патогенные виды могут культивироваться на обогащенных питательных средах, содержащих сыворотку.

Представители рода Borrelia отличаются от других спирохет тем, что клетки микроорганизмов имеют крупные отлогие неравномерные завитки, число которых колеблется от 3 до 10. Патогенными для человека являются возбудители возвратного тифа, передающегося вшами (Borrelia recurrentis) и клещами (Borrelia persica и др.). Они окрашиваются по Романовскому-Гимзе в сине-фиолетовый цвет.

Род Трепонема (Gk. trepein - поворот, nema - нить) представлен тонкими гибкими клетками с 6-14 завитками Концы трепонем сужены или закруглены, некоторые виды на полюсах имеют тонкие удлиненные нити. Помимо типичных форм могут встречаться трепонемы в виде гранул, кист, L-форм и других структур. Трепонемы окрашиваются по Романовскому-Гимзе в бледно-розовый цвет. Типовой представитель – возбудитель сифилиса Trepinema pallidum.

Микроорганизмы рода Leptospira (Gk. leptos тонкий, speira виток) характеризуются очень тонкой клеточной структурой. Лептоспиры образуют 12 – 18 мелких завитков плотно прилегающих друг к другу, формируя первичные спирали. Микроорганизмы имеют две парные осевые нити, прикрепленные к противоположным концам (к базальным тельцам) клетки и направил к друг другу. Средняя часть лептоспир не имеет осевых нитей. Из-за наличия двух пар осевых нитей лептоспиры способны к весьма сложному и активному движению. Во время движения концы микроорганизмов быстро вращаются под прямым углом к основной части тела. В покое концы загнуты крючкообразно, в то время как во время быстрого вращательного движения они походят на петлицы. Вторичные спирали придают лептоспирам вид скобок или буквы S. Цитоплазма слабо преломляет свет. Они окрашиваются в розовый цвет по Романовскому-Гимзе. Некоторые серотипы лептоспир являются патогенными для человека и вызывают лептоспироз.

Спирохеты не обладают ферментирующими свойствами, которые могут дать информацию для лабораторного диагноза и не продуцируют растворимые токсины.

 

                                  Санитарная микробиология.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

    Санитарная микробиология– наука, изучающая микрофлору окружающей среды и ее влияние на здоровье человека и экологическую ситуацию в различных биотопах. Главная задача практической санитарной микробиологии – раннее обнаружение патогенной микрофлоры во внешней среде. При этом следует помнить, что человек и теплокровные животные являются основным резервуаром возбудителей большинства инфекционных заболеваний и подавляющее число возбудителей передается с помощью аэрогенного и фекально-орального механизмов.

Началом развития санитарной микробиологии можно считать 1888 год, когда французский врач Е. Масе предложил считать кишечную палочку показателем фекального загрязнения воды.

Принципы проведения санитарно-микробиологических исследований

  1. Правильный забор проб. Его проводят с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта. Соблюдается стерильность. При невозможности немедленного проведения анализа материал сохраняют в холодильнике не дольше 6-8 часов.
  2. Серийность проводимых анализов. Большинство исследуемых объектов содержит самые разнообразные микроорганизмы, распределенные крайне неравномерно. Проводят забор серии проб из разных участков объекта. В лаборатории образцы смешивают, а затем точно отмеряют необходимое количество материала (обычно среднее по отношению к исследуемому материалу в целом).
  3. Повторность отбора проб. Как правило, в исследуемых объектах состав микрофлоры меняется достаточно быстро, кроме того, патогенные микроорганизмы распределяются в них неравномерно. Соответственно повторный отбор проб позволяет получить более адекватную информацию.
  4. Применение только стандартных методов исследования – дает возможность получать сравнимые результаты в различных лабораториях.
  5. Использование комплекса тестов: прямых (выявляющих патогены) и косвенных.
  6. Оценка объектов по совокупности полученных результатов – с учетом других гигиенических показателей (органолептических, химических, физических и т.д.)

Методы проведения санитарно-микробиологических исследований

Практическая санитарная микробиология использует два основных метода оценки санитарно-эпидемического состояния среды.

  1. Методы прямого обнаружения возбудителя. Являются наиболее точными и надежными критериями оценки эпидемической опасности внешней среды. Основной недостаток – низкая чувствительность.

Трудность выделения патогенных микроорганизмов на питательных средах обусловливают следующие факторы:

  1. Сравнительно низкое содержание патогенных микроорганизмов во внешней среде, составляющих 1/30000 всего видового состава микрофлоры внешней среды. Кроме того, она распределена неравномерно.
  2. Выделение одного возбудителя не всегда свидетельствует о присутствии других видов патогенов. То есть, необходимо проводить исследования практически в отношении каждого патогена, что не осуществимо.
  3. Изменчивость патогенов. Последние, попадая во внешнюю среду, приобретают новые свойства, затрудняющие их распознавание.
  4. Конкурентные взаимоотношения между патогенами и сапрофитами при совместном выращивании на питательных средах.
  5. Недостаточная элективность питательных сред и необходимость использования лабораторных животных и культур тканей.
  6. Методы косвенной индикации возможного присутствия возбудителя во внешней среде.

Используют два критерия, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии возбудителя во внешней среде:

  1. Общее микробное число (ОМЧ)
  2. Содержание санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ)

- Общее микробное число (ОМЧ) определяют путем подсчета всех микроорганизмов в 1 грамме или 1 мл субстрата.

При этом исходят из предположения, что чем больше объект загрязнен органическими веществами, тем выше ОМЧ и тем вероятнее присутствие патогенов. Однако, это не всегда так, так как ОМЧ может быть большим за счет сапрофитов, а патогены могут отсутствовать. Поэтому более адекватно расценивать ОМЧ как показатель интенсивности загрязнения внешней среды органическими веществами.

ОМЧ определяют двумя методами:                                                      

  1. Прямой подсчет.Проводят под микроскопом с помощью специальных камер, например, Петрова или Горяева, либо специальных электронных счетчиков. Предварительно исследуемую пробу гомогенизируют и вносят краситель (обычно эритрозин). Можно проводить прямой подсчет и на мембранных фильтрах, через которые пропускают исследуемую жидкость или взвесь. Метод применяют в экстренных случаях. При необходимости срочного ответа о количественном содержании бактерий (например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и др.). Основной недостаток – невозможность подсчитать бактерии, когда образуются их скопления или когда они «прилипают» к частицам исследуемого субстрата. Не удается подсчитать мелкие микроорганизмы, не говоря уже о вирусах. И, наконец, нельзя отличить живые от погибших микроорганизмов.
  2. Количественный посев на питательные среды.Из приготовленных серийных десятикратных разведений исследуемой жидкости или суспензии по 1 мл переносят в стерильные чашки Петри и заливают расплавленным и остуженным до 45-500С МПА. Равномерно смешивают жидкости и после застывания агара чашки помещают в термостат. После инкубации подсчитывают число выросших колоний и с учетом разведений высчитывают число жизнеспособных микробов в единице объема исследуемого объекта. При этом выявляются лишь мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные бактерии, способные размножаться на МПА. Таким образом, получаемые цифры значительно ниже истинного количества микроорганизмов в исследуемом объекте.

- Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можнокосвенносудить о возможном присутствии патогенов во внешней среде. Исходят из предположения, что чем больше объект загрязнен экстрактами человека и животных, тем больше будет санитарно-показательных микроорганизмов и тем вероятнее присутствие патогенов.

Основные характеристики СПМ:

  1. Микроорганизм должен постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и постоянно выделяться во внешнюю среду.
  2. Микроб не должен размножаться во внешней среде (исключая пищевые продукты), или размножаться незначительно.
  3. Длительность выживания микроба во внешней среде должна быть не меньше, а даже больше, чем у патогенных микроорганизмов.
  4. Устойчивость СПМ во внешней среде должна быть аналогичной или превышать таковую у патогенных микроорганизмов.
  5. У микроба не должно быть во внешней среде «двойников»или аналогов, с которыми их можно перепутать.
  6. Микроб не должен изменяться во внешней среде, во всяком случае, в сроки выживания патогенных микроорганизмов.
  7. Методы идентификации и дифференциации микроорганизмов должны быть простыми.

 

                           Вирусы гриппа.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

Грипп — острое инфекционное респираторное заболевание дыхательных путей, характеризующееся поражением слизистых оболочек верхних дыхательных путей, лихорадкой, симптомами общей интоксикации, нарушением деятельности сердечно-сосудистой и нервной систем..

Наименование болезни «грипп» происходит от французского слова griper — схватить. Первые сведения о гриппозных эпидемиях относятся к далекому прошлому, к временам Гиппократа. Грипп принимал пандемическое распространение каждые 30-40 лет. За последние 100 лет наиболее драматическими  были эпидемии 1889-90, 1918-19, 1957-58, 1968-69 гг. В частности, пандемия гриппа 1918-19 гг была одной из наиболее жестоких. Переболело около 500 млн человек, погибло 20 млн — больше, чем на всех фронтах первой мировой войны, вместе взятых.

В промежутках между пандемиями возникают локальные эпидемии, повторяющиеся каждый год или два, обычно зимой.

Ежегодно острыми заболеваниями дыхательных путей болеет 10 до 25% населения земного шара, а в годы крупных эпидемий и пандемий до 50%. Отсюда становится очевидным огромный экономический ущерб, причиняемый респираторными вирусными инфекциями и, прежде всего, гриппом.

Грипп. Токсономия, классификация.

РНК – содержащие вирусы относятся к семейству Orthomyxoviridae. Семейство включает два рода: род Influenzavirus объединяет вирусы гриппа типов А и В, род Influenza C представлен вирусом гриппа типа С.

Грипп. Этиология.

Возбудитель гриппа — вирус, впервые был выделен у человека в 1933 г. (тип А); вирус гриппа В — в 1940; С — в 1949 г. Вирус гриппа относится к семейству Ortomyxoviridae, включающее 3 вида (типа):

вирус гриппа А
вирус гриппа В
вирус гриппа С

Последовательность открытия вирусов А В и С совпадает с положением этих вирусов в ряду их вирулентности для человека и животных, степени и частоты их антигенных применений, их эпидемиологического значения.

Вирусы гриппа А отличаются от вирусов гриппа В и С тем, что могут циркулировать среди животных, а также вызывать пандемии.

В настоящее время имеется мало информации о свойствах вирусов гриппа С по сравнению с вирусами гриппа А и В. В частности, отсутствуют сведения о наличии у вируса гриппа С нейраминидазы. Кроме этого, вирусы гриппа С отличаются от других типов вируса гриппа тем, что репликация их наиболее интенсивно происходит при температуре ниже средней температуры человеческого тела — при 32°C.

  

Относятся к семейству ортомиксовирусов. Выделяют вирусы гриппа типов А, В и С.

Вирус гриппа имеет сферическую форму, диаметр 80—120 нм. Нуклеокапсид спиральной симметрии, представляет собой рибонуклеопротеиновый тяж (белок NP), уложенный в виде двойной спирали, которая составляет сердцевину вириона. С ней связаны РНК-полимераза и эндонуклеазы. Сердцевина окружена мембраной, состоящей из белка М, который соединяет рибонуклеопротеиновый тяж с двойным липидным слоем внешней оболочки. Среди белков суперкапсидной оболочки большое значение имеют два:

1) нейраминидаза – рецепторный белок, обеспечивающий проникновение вируса в клетку;

2) гемагглютинин. Выполняет рецепторную функцию, обладает сродством с гликопротеидами рецепторов клеток слизистой оболочки дыхательного тракта.

Геном вируса представлен минус-нитевой фрагментированной молекулой РНК. Репликация ортомиксовирусов первично реализуется в цитоплазме инфицированной клетки. Синтез вирусной РНК осуществляется в ядре. Клетки хозяина обеспечивают вирус новыми РНК-транскриптами, 5 – концы которых используются для кэпирования 5 – окончаний вирусной матричной РНК.

Вирусы гриппа А, В и С отличаются друг от друга по типоспецифическому антигену, связанному с белками М и NP. Более узкую специфичность вируса типа А определяет гемагглютинин (Н-антиген). Отмечается высокая антигенная изменчивость в пределах рода.

Изменчивость Н-антигена определяет:                                                          

1) антигенный дрейф – изменения Н-антигена, вызванные точечными мутациями в гене, контролирующем его образование;

2) антигенный шифт – полная замена гена, в основе которой лежит рекомбинация между двумя генами.

Первоначально возбудитель реплицируется в эпителии верхних отделов дыхательных путей, вызывая гибель инфицированных клеток. Через поврежденные эпителиальные барьеры вирус проникает в кровоток. Вирусемия сопровождается множественными поражениями эндотелия капилляров с повышением их проницаемости. В тяжелых случаях наблюдают обширные геморрагии в легких, миокарде и различных паренхиматозных органах.

Основные симптомы включают в себя быстрое повышение температуры тела с сопутствующими миалгиями, насморком, кашлем, головными болями.

Возбудитель распространен повсеместно, увеличение заболеваемости наблюдают в холодные месяцы. Основной путь передачи возбудителя – воздушно-капельный. Наиболее восприимчивы дети и лица преклонного возраста.

Лабораторная диагностика:

1) экспресс-диагностика – определение антигенов вируса в цитоплазме эпителия носа и носоглотки в мазках-отпечатках методом ИФА;

2) заражение культур клеток или куриных эмбрионов отделяемым носа, мокротой или смывами из носоглотки (получают в первые дни болезни);

3) серодиагностика (РСК, РТГА, реакция ингибирования активности фермента).

Специфическая профилактика:

1) для пассивной иммунизации – противогриппозный иммуноглобулин человека;

2) для активной иммунизации – живые и инактивированные вакцины.

Лечение: производные амантадина (ремантадин).

Вирусы кори и краснухи.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

Вирус кори.

Вирус кори - представитель рода Morbillivirus семейства парамиксовирусов. По морфологии существенно не отличается от других представителей семейства. У него отсутствует нейраминидаза. Обладает гемагглютинирующей, гемолитической и симпластической активностью. Вирус имеет гемагглютинин, гемолизин (F), нуклеопротеид (NP) и матричный белок, отличающиеся антигенной специфичностью и иммуногенностью. Вирус кори имеет сероварианты, имеет общие антигенные детерминанты с другими морбилливирусами (вирусом чумы собак и вирусом чумы крупного рогатого скота).

Патогенез поражений.

Вирус первоначально размножается в эпителии верхних отделов дыхательных путей и регионарных лимфоузлах, затем проникает в кровь, гематогенно разносится по организму, фиксируется в ретикуло - эндотелиальной системе. Он вызывает поражения клеток эндотелия сосудов, сыпь, отек и некротические изменения тканей. Частые осложнения - пневмония, возможен отек гортани, круп, редко - энцефалит.

Лабораторная диагностика.

1.Метод экспресс - диагностики - обнаружение вирусных антигенов методом флюоресцирующих антител в пораженных клетках.

  1. Вирусологическая диагностика - исследуют кровь до появления сыпи, слизь из носоглотки заражением культур клеток. Определяют цитопатический эффект, идентифицируют вирус в РТГА, РН и МФА.
  2. Серологические методы - РСК, РТГА, ИФА.

Специфическая профилактика.

Применяют живые аттенуированные вакцины. У контактных можно проводить серопрофилактику противокоревым иммуноглобулином или иммуноглобулином донорским нормальным.

С проблемой морбилливирусов связан подострый склерозирующий панэнцефалит - очень тяжелое прогрессирующее заболевание нервной системы, протекающее по типу медленной инфекции. В основе поражений - персистенция вируса (близкого, но не идентичного вирусу кори) в клетках нейроглии с накоплением дефектных вирионов (без суперкапсида и белка М), с нарушением иммунного реагирования (высокие титры антител к вирусу кори и снижение клеточного иммунитета).

 

 Вирус краснухи

Относится к семейству Togaviridae, роду Rubivirus.

Это сферические оболочечные вирусы с икосаэдральным нуклеокапсидом, заключенным в липидную оболочку. Средняя величина рубивирусов – 60 нм. Поверхность вирусов покрыта гликопротеиновыми спикулами, содержащими гемагглютинины.

Геном образует однонитевая молекула +РНК. РНК сохраняет инфекционность после выделения ее из вириона. Репликативный цикл реализуется в цитоплазме клеток, где выявляются эозинофильные включения. После адсорбции и депротеинизации вирусная РНК выполняет функцию матричной РНК (мРНК) для синтеза вирусных протеинов, образующихся путем протеолитического «нарезания» полипротеина.

Вирус краснухи имеет два антигена:

1) нуклеопротеид, связанный с капсидом;

2) белок суперкапсидной оболочки.

Вирус представлен одним серотипом, обладающим гемагглютинирующей, гемолитической и слабовыраженной нейраминидазной активностью.

У человека вирус вызывает краснуху – острое инфекционное заболевание, обычно наблюдаемое у детей.

Краснуха – высококонтагиозная, широко распространенная инфекция; источник – больной человек; основной путь передачи возбудителя – воздушно-капельный. При выздоровлении формируется пожизненная невосприимчивость.

Патогенез типичной формы включает в себя развитие острых воспалительных реакций в верхних отделах дыхательных путей и циркуляцию возбудителя в кровотоке с последующим поражением различных органов, включая плаценту при беременности.

Характерный признак заболевания – пятнисто-папулезная сыпь бледно-розового цвета, наиболее обильная на разгибательных поверхностях конечностей, спине и ягодицах. Через 2–3 дня кожные элементы исчезают, не оставляя пигментации и шелушения. Взрослые переносят краснуху тяжелее: температура может достигать 39 °C, возможны сильные головные боли и миалгии, выраженные катары слизистой оболочки носа и конъюнктивы.

Наибольшую опасность представляет инфицирование плода во время беременности – при этом наблюдают формирование множественных пороков (катаракты, пороков сердца, микроцефалии и глухоты).

Вирус малоустойчив во внешней среде, погибает при воздействии физических и химических факторов.

Лабораторная диагностика:

1) выделение возбудителя в культурах клеток человеческого эмбриона;

2) серологическая диагностика (РСК, РТГА) методами ИФА и РИА, РН.

Лечение:

1) средства этиотропной терапии отсутствуют;

2) беременным, контактировавшим с больным, профилактически вводят специфический иммуноглобулин.

Специфическая профилактика: живая аттенуироваиная вакцина; иммунизацию женщин детородного возраста следует проводить лишь при отсутствии беременности.

 

                      Вирусы полиомиелита.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

 Вирус полиомиелита

Относится к семейству Picornaviridae, роду энтеровирусов.

Это относительно небольшие вирусы с икосаэдральной симметрией. Средний размер вирусных частиц – 22–30 нм. Устойчивы к действию жировых растворителей. Геном образует несегментированная молекула +РНК. Экстрагированная РНК сохраняет инфекционность даже после удаления молекулы белка под действием протеаз.

Каждая вирусная частица состоит из капсида, построенного из 60 субъединиц и содержащего 4 полипептида одной молекулы VPg, соединенной с РНК.

Репликация осуществляется в цитоплазме; репродукционные процессы обычно занимают не более нескольких часов и устойчивы к действию ингибиторов синтеза клеточной РНК. Первая стадия (после депротеинизации) – синтез +РНК и вирусных белков, которые транслируются в единую полипептидную нить. Сборка клеток хозяина, заполнение капсида также осуществляются в цитоплазме. Выход вируса сопровождается лизисом клетки.

Вирусы кислотоустойчивы и относительно стабильны при низких значениях рН, что позволяет им выживать в кислой среде желудка, а отсутствие оболочки делает их резистентными к действию желчных кислот.

Антигенная структура полиовирусов стабильна, возможны лишь редкие серологические вариации.

Возбудители высококонтагиозны, особенно при наличии большого скопления людей и нарушениях элементарных санитарных правил и гигиены. Основной механизм передачи – фекально-оральный.

Все полиовирусы вызывают полиомиелит – острую инфекцию с поражением нейронов продолговатого мозга и передних рогов спинного мозга.

Первичный очаг размножения локализован в эпителии рта, глотки, тонкой кишки, а также в лимфоидных тканях кольца Пирогова и пейеровых бляшках. Возможно вторичное проникновение вируса из эпителия слизистых оболочек в лимфоидные ткани и кровоток (первичная вирусемия), а затем и в различные органы, исключая ЦНС.

При наличии сывороточных антигенов дальнейшая диссемининация возбудителя прекращается (абортивная инфекция), в противном случае развивается вторичная вирусемия и возбудитель попадает в ЦНС. Нейроны передних рогов спинного мозга, продолговатого мозга и варолиевого моста несут рецепторы для полиовирусов.

Лабораторная диагностика:

1) выделение возбудителя в первичных культурах ткани или культурах клеток HeLa, Hep-2, СОЦ; индикацию возбудителя осуществляют по цитопатическому эффекту и его нейтрализации типовой антисывороткой;

2) серологические исследования включают в себя определение антигенов в сыворотке и спинномозговой жидкости; выявление высоких титров IgM указывает на наличие инфекции.

Лечение: средства специфической противовирусной терапии отсутствуют; проводят симптоматическое лечение и предупреждают развитие вторичных бактериальных инфекций.

Специфическая профилактика:

1) живая (аттенуированная) вакцина;

2) убитая вирусная вакцина.

 

                                               Вирусы коксаки и Экно.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

Вирусы Коксаки выделены в 1948 г. в США в местечке Коксаки из испражнений больных полиомиелитоподобным заболеванием. Вирусы Коксаки по степени патогенности для новорожденных мышей разделены на 2 группы - Коксаки А (поражают скелетную мускулатуру с развитием вялых параличей) и Коксаки В (поражают ЦНС с развитием спастических параличей; вызывают гибель мышей). Группа А представлена 23 серотипами, группа В - 6 серотипами, отличающимися по антигенным свойствам. Вирусы обладают гемагглютинирующей активностью.

Вирусы ECHO получили название по начальным буквам слов: enteric cytopathogenic human orphans viruses (дословно: кишечные цитопатогенные человеческие вирусы-сироты). Вирусы выделены в 1951-1953 гг. от больных с заболеванием, напоминающим полиомиелит. В отличие от вирусов полиомиелита и Коксаки вирусы ECHO непатогенны для всех видов лабораторных животных. Известно более 30 серотипов вирусов ECHO, отличающихся по антигенным свойствам. Многие серотипы обладают гемагглютинирующими свойствами. Энтеровирусы серотипов 68-71 выделены в 70-х годах. Наибольшее значение в патологии человека имеют вирус типа 70 (выделен во время пандемии острого геморрагического конъюнктивита) и вирус типа 71 (выделен во время эпидемии от больных менингитами и энцефалитами). По биологическим свойствам эти вирусы занимают промежуточное положение среди других энтеровирусов.

Лабораторная диагностика.Исследуемым материалом служат фекалии, носоглоточный смыв, кровь, спинномозговая жидкость. Вирусы выделяют в культуре клеток и на новорожденных мышах. Выделенный вирус идентифицируют с помощью РН на соответствующих биологических объектах, а также РТГА (для энтеровирусов, обладающих гемагглютинирующей активностью). Серодиагностика такая же, как при полиомиелите.

Специфическая профилактика и лечение.Отечественными учеными разработана инактивированная вакцина против энтеровируса серотипа 71. В отношении других энтеровирусов вакцинопрофилактика отсутствует. Лечение симптоматическое.

 

ЕСНО-вирусы. Вирусы Коксаки

Относятся к семейству Picornaviridae, роду энтеровирусов.

Строение вириона такое же, как у вируса полиомиелита.

ЕСНО вирусы выделены в особую группу кишечных вирусов вследствие полного отсутствия патогенного действия на лабораторных животных. Выделяют 34 серовара; разделение основано на свойствах специфического антигена вирусного капсида, нейтрализуемого типоспецифическими антигенами. 12 серотипов способны к гемагглютинации, некоторые серотипы спонтанно элюируют.

Групповой специфический антиген отсутствует. Некоторые типоспецифические антигены обладают определенной перекрестной реактивностью.

Заражение ЕСНО-вирусами происходит фекально-оральным путем, реже ингаляционно. Как правило, возбудитель не диссеминирует из очага первичной инфекции; реже он распространяется гематогенно, а при тяжелых формах его можно выделить из пораженного органа.

ЕСНО-вирусы вызывают:

1) ОРВИ и лихорадку неясного генеза;

2) асептические менингиты (протекают относительно легко и не вызывают осложнений);

3) восходящие параличи и энцефалиты, напоминающие поражения, вызываемые полиовирусами;

4) лихорадочное состояние, сопровождающееся кореподобными высыпаниями.

После перенесенного заболевания формируется гуморальный типоспецифический иммунитет, продолжительность которого колеблется в разных пределах.

Лабораторная диагностика:

1) выделение возбудителя проводят заражением клеток почек обезьян материалом из спинномозговой жидкости и фекалий;

2) серодиагностика – обнаружение антигенов (в парных сыворотках, забираемых в начале болезни и на 2–3 неделе); для выявления используют реакции РН, РСК и РТГА.

Лечение и профилактика: средства терапии и эффективной профилактики ЕСНО-вирусных инфекций отсутствуют; лечение поражений симптоматическое.

Вирусы Коксаки – типичные пикорнавирусы.

По биологическим свойствам выделяют:

1) вирусы группы А. Вызывают диффузный миозит с воспалением и очаговым некрозом поперечно-полосатых мышц;

2) вирусы группы В. Вызывают поражения ЦНС (очаговые дегенерации, параличи), некроз скелетной мускулатуры и иногда миокарда, воспалительные поражения селезенки и др.

Каждая группа включает в себя серовары: группа А – 24, группа В – 6. Разделение основано на свойствах типоспецифического антигена. Серовары не содержат группоспецифического антигена.

Некоторые вирусы Коксаки способны вызывать гемагглютинацию эритроцитов человека.

Основные механизмы передачи – фекально-оральный и контактный (через отделяемое носоглотки).

Инфекционный процесс, вызванный вирусами Коксаки, сопровождается синтезом типоспецифических антигенов, обнаруживаемых в сыворотке через неделю после начала заболевания.

Лабораторная диагностика:

1) заражение культуры клеток и мышат-сосунков; материал – смывы и мазки из носоглотки, содержимое кишечника;

2) гемагглютинирующие варианты выявляют с помощью РТГА, характеризующейся типоспецифичностью;

3) принадлежность к сероварам определяют в РСК или РН с типоспецифическими антисыворотками.

Специфической профилактики нет.

Этиотропная терапия отсутствует.

 

 

 

Вирусы натуральной оспы.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

     Натуральная оспа (variola vera) — острое заразное заболевание, характеризующееся общей интоксикацией, типичным лихорадочным периодом, папулезно-пустулезными высыпаниями на коже и слизистых оболочках. Возбудитель оспы был открыт Пашеном в 1906 г. в содержимом оспенных пузырьков больного.


Морфология и биологические свойства. Вирус имеет форму куба со сглаженными краями, размер его 150— 260 нм.

Зрелая частица вируса имеет сложное строение: внутри вириона находится нуклеопротеид,  по бокам которого расположены два боковых тельца. Вирион покрыт трехслойной внешней оболочкой, в состав которой входят липопротеиды и белки.


В 1892 г. Гварниери обнаружил включения вируса на гистологических срезах роговицы зараженного кролика. Тельца Гварниери представляют скопления вирусных частиц. 


Величина их от 1—4 до 10 мкм. Форма шаровидная  или серповидная, по Романовскому окрашивается в  красный цвет. Обнаружение их в эпителии кожи или слизистых оболочках имеет диагностическое значение.


Устойчивость. Вирус оспы устойчив к высушиванию, эфиру и фенолу. В сухих оспенных корочках на предметах обихода он может сохраняться годами. Длительно жизнеспособен в 50% глицерине при низких температурах. Вирус оспы чувствителен к нагреванию, действию света и дезинфицирующим веществам.


Патогенность. Вирусом оспы легко заражаются крупный и мелкий рогатый скот, обезьяны, кролики, морские свинки, однако воспроизвести заболевание удается только у обезьян. У других животных он вызывает местные поражения.


Патогенез и клиника. Вирус проникает в организм человека через слизистые оболочки дыхательных путей и кожу. Заболевание начинается остро, внезапно, после инкубационного периода в 12—15 дней. Для оспы характерен продромальный период, продолжающийся 3 - 4 дня. В это время температура достигает 39—40°С, появляются боль в пояснице, крестце и сыпь, сходная с коревой или скарлатинозной. Она располагается в виде треугольников: один охватывает низ живота и внутренние поверхности бедер, два других — верхние, плечевые. Затем температура падает, сыпь исчезает, состояние больного улучшается. Вслед за этим появляется истинная сыпь. Для нее характерна последовательность  превращения - из папулы (бугорок) в везикулу (пузырек) и пустулу (гнойничок). Сыпь выступает вначале на лице, затем на руках, туловище и нижних конечностях. Нагноение пузырьков вновь сопровождается повышением температуры, тяжелым состоянием, помрачением сознания, мучительным зудом и истечением гноя из пустул. К 11 — 12-му дню происходит подсыхание пустул и образование корочек. Боли уменьшаются и состояние больного улучшается. После отпадения корочек остаются рубчики-рябины. Летальность при оспе достигает 20—30%, а при геморрагической форме — 100%.


У привитых при недостаточности иммунитета возникает атипичное течение оспы — вариолоид. Течение заболевания легкое, повышенная температура держится около 3 дней, без вторичной волны. Сыпь необильная, не имеет последовательности в развитии элементов, часто полиморфна, подсыхает на 7—8-й день. Рубцов не оставляет.


Иммунитет. После перенесенного заболевания иммунитет сохраняется в течение всей жизни.


Вирусологическая диагностика. Микроскопические методы исследования широко используют в острой стадии заболевания. Микроскопируют в световом микроскопе мазки и отпечатки, приготовленные из везикул и пустул больного. При окраске по Морозову вирусные частицы  (элементарные тельца Пашена ) имеют вид темно - коричневых округлых образований, расположенных по одному  или в виде коротких цепочек и скоплений на светло-коричневом фоне детритных масс. При окрашивании флюорохромами, например примулином, элементарные частицы имеют бело-голубое свечение при микроскопировании в ультрафиолетовом свете. Непрямой метод флюоресценции используют для обнаружения специфического антигена в мазках и отпечатках. Для этого препарат обрабатывают вначале специфической иммунной сывороткой, а затем видовой антиглобулиновой флюоресцирующей сывороткой. Образующиеся специфические микропреципитаты выявляются при люминесцентной микроскопии в виде желтовато-зеленых мономорфных образований. Тельца Гварниери можно обнаружить в клетках пораженного эпителия, в зараженной культуре тканей, в эпителии роговицы кролика, которому вводят содержимое оспенного пузырька через царапины на роговице. 


Биологические методы исследования используют, заражая содержимым оспенного пузырька хорион-аллантоисную оболочку 11—12-дневных куриных эмбрионов или культуры клеток HeLa, Нер-1, Нер-2, на которых вирус вызывает цитопатический эффект. Культура фибробластов куриных эмбрионов не изменяется под действием вируса. Вирус типируется с помощью серологических реакций, по цитопатическому действию на культуру клеток и его отсутствию при добавлении специфических иммунных сывороток.


Для выявления антител в крови больного исследуют парные сыворотки, взятые от больного в первые дни болезни и через 1—2 нед после взятия первой сыворотки. Нарастание титра антител во второй сыворотке больше чем в заболевание оспой.


По инициативе Советского Союза в 1958 г. на XI Ассамблее Всемирной организации здравоохранения было принято решение о ликвидации оспы во всем мире путем проведения массовой вакцинации. Это мероприятие сыграло решающую роль в борьбе с натуральной оспой, и в настоящее время, по сообщению ВОЗ, случаи оспы не за¬регистрированы ни в одной из стран, ни на одном из континентов.


Профилактика и лечение. Основными мероприятиями при появлении заболевания являются немедленная изоляция (госпитализация) больного не менее чем на 40 дней со дня заболевания, дезинфекция очага, вакцинация окружающих. Лица, находившиеся в контакте с больным, также изолируются на срок наибольшей инкубации (15 дней) и находятся под наблюдением врача. Для предупреждения завоза оспы из стран, в которых регистрируют случаи этого заболевания, проводят ряд мер карантинного порядка, утвержденных международными соглашениями (оповещение других стран о наличии заболеваний, закрытие границ и др.).

 

Вакцинация является основой профилактики оспы. Для получения вакцины используют вирус осповакцины, который является самостоятельным типовым видом семейства поксвириде. Он имеет общее антигены с вирусом оспы человека и вызывает образование прочного иммунитета без выраженного заболевания. Для получения противооспенной вакцины телят заражают вирусом осповакцины, который для усиления иммуногенности предварительно проводят через организм кролика. Этим материалом— лапиной (от лат. lapinus — кролик) заражают телят, делая крестообразные надрезы на коже. В них втирают лапину. На 5—6-й день при появлении везикул их соскабливают, материал (детрит), содержащий вирус, соединяют с глицерином и выдерживают при комнатной температуре несколько дней, а затем в холодильнике при 2—5°С в течение 2—3 нед. Соскоб тщательно измельчают, определяют прививочную дозу, проверяют его безвредность и стерильность и выпускают для использования в ампулах, которые содержат 0,1—0,2 мл высушенной под вакуумом вакцины.


В последние годы стали применять оспенную осповакцину (вирус осповакцины выращивают на куриных эмбрионах) и тканевую (вирус выращивают на культуре тканей). 


Для лечения, помимо симптоматических и патогенетических средств, используют специфический противооспенный донорский иммуноглобулин.

 

 

 

                     Санитарно - бактериологическое исследование воды

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

Исследование воды на общую бактериальную обсемененность и определение санитарно-показательных микроорганизмов


Общее количество бактерий в воде определяют путем посева воды в стерильные чашки Петри, в которые затем добавляют расплавленный и остуженный до 42—45°С агар. При исследовании чистой воды засевают 1 мл, а при исследовании загрязненных вод делают посевы по 1 мл определенных разведений воды (1 : 10— 1 : 100 и более). Чашки помещают в термостат при 37°С на 24 ч (или при 20—22°С на 48 ч) и по истечении срока инкубации подсчитывают все колонии, выросшие как на поверхности агара, так и в глубине его, выбирая чашки, в которых наиболее удобно произвести подсчет колоний.


Общее количество бактерий определяют в пересчете на число колоний, выросших при посеве 1 мл воды. Считают, что в чистой воде общее количество бактерий должно быть не более 100 в 1 мл воды, в воде сомнительной чистоты— от 100 до 1000, в загрязненной — свыше 1000. Общее количество бактерий в 1 мл водопроводной воды не должно превышать 100; для колодцев и открытых водоемов допускают до 1000.


Определение санитарно-показательных микроорганизмов. Интенсивность фекального загрязнения воды характеризуют два показателя: 

1) индекс кишечной палочки (коли-индекс)—количество БГКП, обнаруженное в 1 л воды;

2) титр кишечной палочки (коли-титр) — наименьшее количество миллилитров воды, в котором обнаруживают БГКП.

Для определения количества БГКП используют метод мембранных фильтров, который основан на концентрировании определенных объемов воды на мембранных фильтрах с последующим посевом их на среду Эндо. Бродильные (титрационные) методы, предусматривают посев определенного количества воды на среды обогащения, а метод прямого посева — определенных разведений воды на среду Эндо. Бродильный метод удлиняет срок анализа на сутки.


Выбор метода исследования зависит от качества воды. Чистые воды, которые хорошо фильтруются (вода централизованного водоснабжения), исследуют методом мембранных фильтров. Если воды содержат различные примеси, применяют метод бродильных проб. Метод прямого посева на среду Эндо используют редко, при исследовании сильно загрязненных проб воды.


При определении БГКП учитывают все разновидности кишечной палочки, дифференцируя колонии по лактозному признаку, оксидазному тесту и ферментации глюкозы.
Метод мембранных фильтров. Сущность метода заключается в концентрации БГКП из определенного объема воды на мембранном фильтре, выращивании их при 37°С на среде Эндо, дифференциации выросших колоний и определении коли-индекса. Мембранные фильтры представляют собой проницаемые для воды нитроцеллюлозные пленки с порами разного диаметра в зависимости от номера фильтра. Для фильтрации воды централизованного водоснабжения используют фильтры № 2 и 3, диаметр пор которых меньше диаметра бактериальной клетки, а для, загрязненной воды применяют еще и фильтры № 6, задерживающие крупные частицы, взвешенные в воде. Перед употреблением фильтры стерилизуют 10 мин кипячением в дистиллированной воде, меняя ее 3—5 раз. Мембранные фильтры помещают в фильтровальный аппарат Зейтца. Фильтруют не менее 300—500 мл чистой воды, 100—10—: 1 мл или по 1 мл соответствующих разведений более загрязненной воды. После фильтрации пробы воды мембранный фильтр переносят на среду Эндо, разлитую в чашки Петри. Поверхность фильтра с осевшими на не микробами должна быть обращена вверх. Посевы выдерживают в термостате при 37°С в течение 18—24 ч. Если на фильтрах вырастают колонии, характерные для БГКП: красные, темно-красные с металлическим блеском или без него (лактозоположительные), из них готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. При наличии грамотрицательных, не образующих спор палочек ставят тест на наличие оксидазы. Число колоний, не обладающих оксидазной активностью, подсчитывают и при содержании; их более трех в 1 л питьевой воды и более десяти в 1 л воды колодцев немедленно дают ответ о наличии БГКП в количестве, превышающем норму. Сомнительные колонии— розовые с темным центром и бесцветные, содержащие грамотрицательные палочки и дающие отрицательный результат пробы на оксидазу, пересевают в полужидкую среду с глюкозой (2—3 колонии). При образовании кислоты и газа через 5—6 ч пребывания в термостате при 37°С выделенную культуру также относят к БГКП.


Отрицательный ответ об отсутствии в пробе воды БГКП дают при отсутствии роста на фильтре колоний кишечной палочки через 18—24 ч, а также рри наличии колоний, обладающих оксидазной активностью.


Результаты анализа выражают в виде коли-индекса, который высчитывают, умножив количество выросших колоний БГКП на 1000 и разделив на объем профильтрованной воды.


При исследовании воды открытых водоемов и сточных вод на фильтре подсчитывают только число лактозоположительных колоний кишечной палочки — ЛКП (темно- красные с металлическим блеском и без него). Наличие характерной морфологии, отрицательного теста на оксидазу свидетельствует о присутствии БГКП. При нетипичном росте, отсутствии реакции на оксидазу и в спорных случаях производят посев подозрительных колоний на полужидкую среду с лактозой и определяют ферментацию до кислоты и газа при 37°С. Учетом только лактозоположительных кишечных палочек можно закончить исследование воды водоемов (пресных и соленых) в местах хозяйственно-бытового и культурного водопользования, на этапах очистки питьевой воды, необеззараженных сточных вод и воды открытых водоемов.


Все БГКП (лактозоположительные и лактозоотрицательные варианты) определяют при изучении процессов самоочищения воды, при изучении искусственных водоемов (водохранилищ и каналов), выборе нового источника водоснабжения, преобладании на фильтре розовых оксидазоотрицательных колоний.


Титрационный (бродильный) метод. Сущность бродильного метода заключается в посеве определенного количества воды на жидкие питательные среды накопления, подращивании БГКП при 37° с последующим высевом на плотные питательные среды (среда Эндо), дифференциации выросших колоний и определении БГКП в 1 л воды. Выбор объема исследуемой воды зависит от характера водоисточника. Выбранные объемы проб засевают во флаконы и пробирки с глюкозопептонной или лактозопептонной средой, внося 100 и 10 мл воды в 10 мл или 1 мл концентрированной среды, а 1 мл воды или 1 мл соответствующего разведения воды — в пробирки с 5 мл среды обычной концентрации. Инкубируют при 37° С в течение 24 ч и делают высев на среду Эндо (с расчетом получения роста изолированных колоний) из каждого флакона и пробирки, где наблюдают помутнение, образование кислоты и газа или только помутнение и образование кислоты. Посевы выдерживают при 37°С в течение 16— 18 ч. При росте на среде Эндо темно-красных с металлическим блеском или без него колоний, в которых при микроскопии обнаруживают грамотрицательные палочки, не обладающие оксидазной активностью, ответ о присутствии БГКП выдают через 40—42 ч. При росте на среде Эндо розовых или бесцветных колоний, оксидазонегативных, содержащих грамотрицательные палочки, их отсевают на среду с глюкозой. Образование кислоты и газа в пробирке с этой средой через 24 ч инкубирования при 37°С свидетельствует о наличии БГКП. Результаты исследования выражают коли-индексом, величину которого определяют по таблице.


Отрицательный ответ «БГКП не обнаружены» может быть выдан при отсутствии изменения среды накопления (или при наличии помутнения без образования кислоты) через 24 и 40—42 ч, если на среде Эндо нет роста колоний, характерных для БГКП. Оксидазоположительные красные или розовые колонии, или оксидазоотрицательные колонии, содержащие грамположительные палочки или кокки не учитываются.


Определение оксидазной активности колоний БГКП проводят непосредственно на мембранном фильтре, который переносят на фильтровальный лист бумаги и смачивают реактивом. Через 2—5 мин его помещают обратно на среду Эндо и учитывают результаты. При отрицательной реакции цвет колоний не меняется, при положительной— колонии изменяют цвет на сине-фиолетовый.


При бродильном методе фильтровальную бумагу смачивают реактивом, часть колонии со среды Эндо переносят штрихом на бумагу. При положительном результате реакции не позднее 1—2 мин штрих синеет, при отрицательном — не меняется. Реактив можно закапать непосредственно на колонию или сектор посева на среде Эндо. Следует помнить, что реактив обладает бактерицидными свойствами, поэтому колонии для дальнейших исследований непригодны.


При отсутствии реактива для оксидазного теста делают прямой посев или высев со среды накопления на модифицированную среду Эндо с молоком или желатином. Дифференцируют БГКП от других грамотрицательных палочек, которым не придают санитарно-показательного значения, по наличию у последних протеолитической активности: образованию кратера на среде с желатином или зоны протеолиза (просветления вокруг колонии) на среде Эндо с молоком.


Дополнительные исследования, выявляющие наличие фекальных кишечных палочек (ФКГІ) —показателей свежего фекального загрязнения, проводят путем постановки теста ферментации лактозы до кислоты и газа при 43— 45°С, засевая колонии в желчно-лактозную среду с бриллиантовым зеленым, или лактозный бульон с борной кислотой, или полужидкую среду с лактозой. Наличие кислоты и газа при инкубации в течение 24 ч при 43—44,5°С, а также отсутствие роста на среде Козера (отношение к солям лимонной кислоты) указывает на свежее фекальное загрязнение воды.


Качество питьевой воды определено ГОСТ 2874-73, в котором предусмотрено как норма:

1) общее количество бактерий в 1 мл воды не более 100; 

2) количество БГКП в 1 л воды (коли-индекс) на плотных питательных средах (при использовании метода мембранных фильтров) не более 3, а при использовании жидких сред накопления коли-титр не менее 300. Вода питьевая, забираемая из колодцев, регламентирована «Санитарными правилами по устройству и содержанию колодцев» (Минздрав СССР, 1975), в которых предусмотрено БГКП не более 10 в 1 л, а коли-титр не менее 100. ГОСТ 17.1.3.03-77 определяет правила выбора и оценки качества источников централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения. Вода поверхностных источников хозяйственно-питьевого водоснабжения не должна содержать возбудителей кишечных заболеваний, а число БГКП должно быть не более 10 000 в 1 л воды. Вода плавательных бассейнов отвечает требованиям рекомендации Минздрава СССР 1976 г., если ее коли-титр не менее 100. Минеральные воды должны иметь коли-титр более 300 и микробное число не более 100 в 1 л (ГОСТ 13273-67). Сточные воды считаются достаточно обеззараженными при коли-титре не менее 1, коли-индексе не более 1000 в 1 л, при наличии остаточного хлора не менее 1,5 мг/мл.

 

 

                            Санитарно-бактериологическое исследование почвы.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

Почва является основным резервуаром микроорганизмов в природе. Качественный состав микрофлоры почвы исключительно разнообразен. Микробиологическое исследование почвы имеет важное значение. 

 

Оно проводится:

 

1) при строительстве жилых объектов, прежде всего детских учреждений (детские сады, пионерские лагеря и др.);

 

2) при решении вопросов о водоснабжении и канализации населенных мест;

 

3) для контроля за работой сооружений по очистке населенных мест;

 

4) для санитарной оценки методов обезвреживания нечистот и твердых отбросов; 

 

5) при эпидемиологических обследованиях для выяснения путей заражения и сроков выживания патогенных микробов в окружающей среде, в том числе и в почве;

 

6) для санитарной оценки почв, загрязненных различными химическими веществами.


В зависимости от поставленной задачи проводят краткий или полный санитарно-микробиологический анализ почвы (Инструкция по санитарно-бактериологическому исследованию почвы, 1958; «Методические указания по санитарно-микробиологическому исследованию почвы», № 1446, 1976). Краткий санитарно-микробиологический анализ почвы включает определение: 

 

1) общего количества бактерий, растущих на мясо-пептоном агаре; 

 

2) санитарно-показательных микроорганизмов — БГКП;

 

3) термофильных бактерий.


Отбор и предварительная обработка проб почвы. Для изучения микробного загрязнения на каждые 1000 м2 территории выделяют два участка по 25 м2 каждый. Один из них должен находиться на чистой территории, другой — на предполагаемом участке загрязнения. Отбирают средний образец почвы, состоящий из отдельных проб, взятых в 3—5 точках по диагонали, или в 5 точках, взятых под углом и в центре участка. Отдельную пробу берут из поверхностного слоя почвы глубиной до 20—25 см, снимая верхний слой. После чего лопатку прожигают, берут кусок почвы и от него в стерильную посуду отделяют пробу почвы массой 200—300 г. Из отдельных хорошо перемешанных проб почвы составляют средний образец, масса которого должна быть не менее 1 кг. От среднего образца отделяют 200—300 г и вносят в стерильную посуду. Затем почву дробят в стерильной ступе, просеивают через стерильное сито, отбирают навеску для исследования от 1 до 30 г, в зависимости от предполагаемой степени загрязненности почвы.


Определение общего количества бактерий. Этот показатель имеет условное санитарно-гигиеническое значение. Делают разведения почвенной навески от 1:10 до 1 : 10 000— 1 : 100 000. Из каждого разведения производят посев 1 мл в стерильную чашку,» в которую вносят расплавленный и остуженный до 45°С агар, а затем перемешивают. После застывания агара посевы помещают в термостат на 48 ч при 28—30°С. Для подсчета выросших колоний берут те разведения, при которых на чашке выросло от 50 до 150 колоний. После подсчета колоний делают пересчет на 1 г почвы.


Определение БГКП. Для определения фекального загрязнения почвы используют два метода: 

 

1) титрационный; 

 

2) метод мембранных фильтров.
 

Определение БГКП в почве титрационным методом. Из первого разведения почвенной суспензии (1:10) 10 мл засевают в 50 мл среды Кесслера, что соответствует посеву 1 г почвы. Из следующих разведений засевают по 1 мл в 9 мл той же среды. Посевы выращивают 48 ч при 43°С. Отсутствие газообразования и помутнения в бродильных сосудах со средой через 48 ч позволяет дать отрицательный ответ. При наличии в средах газообразования и помутнения или только помутнения производят высев на чашку со средой Эндо. Чашки инкубируют 24 ч при 37°С. Типичными для кишечных палочек являются колонии красного или розового цвета. Дальнейшую идентификацию колоний проводят аналогично исследованию воды на наличие кишечных палочек.


Ускоренное определение кишечных палочек методом мембранных фильтров. Этот метод применяют при исследовании малозагрязненных почв. Через мембранные фильтры № 3 пропускают 5—10 мл почвенной суспензии из разведения 1:10. Дальнейший ход аналогичен определению этим методом кишечных палочек в воде. Результат бактериологического исследования выражают коли-индексом или коли-титром. Под коли-индексом подразумевают количество кишечных палочек в 1 г почвы, под коли-титром — наименьший объем почвы, в котором еще обнаруживают кишечную палочку.


Определение термофильных бактерий. Термофильные бактерии попадают в почву вместе с созревшими органическими удобрениями (навоз, компост). Сточные жидкости, испражнения, свежий навоз богат кишечной палочкой, но бедны термофилами. Поэтому почвы, содержащие много кишечных палочек и мало термофилов, могут рассматриваться как загрязненные фекалиями. Учет термофильных бактерий производят на агаре, который разливают толстым слоем. Посевы делают из разведений почвы 1 : 10— 1 : 100 000 в количестве 1 мл на две чашки с агаром. Выращивают 24 ч при 60°С. Пересчет термофильных микробов на 1 г почвы производят аналогично расчету при изучении общей обсемененности.


Помимо описанных показателей в почве, можно определить также титр CI. perfringens, хотя значение этого показателя в целях определения санитарного состояния почвы невелико в связи с тем, что CI. perfringens может не только долго сохраняться, но и размножаться в почве. Однако наличие этого микроба косвенно может указывать на присутствие других клостридий, например возбудителей столбняка — CI. tetani и ботулизма — Gl. botulinum.


Микробиологические исследования проводят в комплексе с химическими, определяя содержание нитрифицирующих бактерий, аммонифицирующих, аэробных целлюлозоразлагающих микроорганизмов, а также присутствие аммиака и нитритов.


В случае необходимости, по эпидемиологическим показаниям, определяют наличие в почве патогенных энтеробактерий, возбудителей пищевых токсикоинфекций, проводят санитарно-вирусологические исследования.

 

 

Санитарно-бактериологическое исследование молока и молочных продуктов.

 

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

       Молоко и молочные продукты могут содержать различные микроорганизмы. При изготовлении кисломолочных продуктов в молоко после пастеризации добавляют закваску, которая характеризует специфическую микрофлору данного продукта. Мезофильные молочнокислые стрептококки используют для приготовления творога, сметаны, ряженки, простокваши; молочнокислые ацидофильные палочки— для изготовления ацидофильных продуктов; болгарскую палочку — для приготовления южной простокваши; дрожжи й молочнокислые бактерии —в производстве кефира. Неспецифическую микрофлору молока составляют гнилостные микробы, аэробные и анаэробные бациллы, плесени и многие другие. Они придают молоку неприятный вкус и запах. Обсеменение молока микробами происходит уже в процессе дойки, и интенсивность его зависит от соблюдения санитарно-гигиенических условий при получении молока. Плохие условия хранения молока способствуют нарастанию в нем микрофлоры.


Патогенные микроорганизмы могут попадать в молоко в процессе его получения и транспортировки из окружающей среды или могут содержаться в молоке больных животных (стафилококки, бруцеллы, микобактерии туберкулеза). Через молоко и молочные продукты могут передаваться возбудители различных заболеваний.


В соответствии с ГОСТ 9225—68 «Молоко и молочные продукты», и «Методическими указаниями по санитарно- бактериологическому исследованию продукции молочных кухонь» от 15.12.65 г. при бактериологическом исследовании молока, сливок, масла, творога, мороженого и других молочных продуктов производят определение:

1) общего количества бактерий,

 2) количества БГКП (коли-титра). По эпидемическим показаниям проводят бактериологическое исследование для выявления возбудителя заболевания, возникновение которого связывают с употреблением данного продукта.


Образцы продуктов для бактериологического исследования отбирают раньше, чем для физико-химического исследования. Из образцов молока, сливок, молочнокислых продуктов, мороженого, масла, отбирают 1 мл и добавляют 9 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия. К измельченным навескам в 10 г сыра, творога, сгущенного молока, сухих сливок добавляют по 90 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия. Из полученного разведения 1:10 готовят разведения 1 : 100 и т. д.


Определение общего количества бактерий. Производится путем посева 1 мл различных разведений исследуемого продукта. Разведение для посева выбирают в соответствии с учетом наиболее вероятного микробного обсеменения. Ход исследования и определение числа бактерий в 1 г продукта соответствует описанной выше методике. Определение общего количества бактерий в кисломолочных продуктах, содержащих обильную специфическую микрофлору, не проводят. При контроле состава микрофлоры кисломолочных продуктов просматривают мазки, приготовленные из исследуемого продукта, и окрашенных метиленовым голубым. В поле зрения препарата должны находиться только специфические для данного продукта микроорганизмы.


Определение БГКП. Посевы из каждого разведения продукта производят в пробирки со средой Кесслер. Продукт считается не загрязненным кишечной палочкой при отсутствии помутнения и образования газа в этой среде. При помутнении среды и наличии газа в поплавке производят высев из соответствующего разведения на среду Эндо. При наличии на этой среде колоний, типичных для: БГКП, делают мазки и окрашивают их по Граму. В случае обнаружения грамотрицательных палочек производят посев на среду Козера и на среду с глюкозой. Пробирки со средой Козера помещают в термостат при 37°С, а пробирки с глюкозой при 43°С. Через 18—24 ч учитывают результаты. При отсутствии кислоты и газа на среде с глюкозой дают отрицательный ответ об отсутствии БГКП. Наличие кислоты и газа в среде с глюкозой и отсутствие роста на среде Козера указывают на присутствие цитратотрицательных разновидностей БГКП, Изменение цвета среды Козера из оликово-зеленого в синий свидетельствует, что обнаруженные бактерии относятся к цитратположительным разновидностям кишечных палочек, которые не учитывают. 

 

     Присутствие патогенных микробов недопустимо.
Бактериологическое исследование изделий из крема и сливочного масла осуществляют в плановом порядке и по эпидемическим показаниям, согласно «Методическим указаниям по проведению санитарно-бактериологического исследования на предприятиях, вырабатывающих кондитерские кремовые изделия» Минздрава СССР 1976 г.

Санитарно-бактериологическое исследование смывов.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

    

     Для оценки санитарно-гигиенического состояния предприятий общественного питания, детских, лечебно-профилактических учреждений, предприятий пищевой торговой сети определяют бактериологическую загрязненность рук работающего персонала и предметов окружающей обстановки. Эти исследования необходимы также при выявлении путей распространения инфекционных заболеваний. Бактериальное загрязнение определяют путем изучения микрофлоры смывов, сделанных с рук и поверхностей исследуемых объектов.


В зависимости от целей исследования в смывах определяют:

 

1) наличие БГКП;

 

2) общую бактериальную обсемененность с пересчетом на 1 см2 исследуемой площади;

 

3) наличие Staph, aureus и других патогенных микробов
 

На предприятиях общественного питания, в детских учреждениях обычно исследование ограничивают обнаружением БГКП (как показателя фекального загрязнения объекта) и Staph, aureus. В лечебно-профилактических учреждениях в соответствии с «Инструкцией по бактериологическому контролю комплекса санитарно-гигиенических мероприятий в лечебно-профилактических учреждениях (отделениях хирургического профиля, в палатах и отделениях реанимации и интенсивной терапии)» — приложения к приказу Минздрава СССР № 720-78 г., кроме этих показателей, при необходимости определяют количественную характеристику обсеменения, наличие сине-гнойной палочки. Смывы берут стерильными ватными тампонами или салфетками, смоченными стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. При взятии с больших поверхностей (столы, стены и др.) смывы производят в нескольких местах исследуемого предмета площадью примерно в 100X100 см. Смывы с рук производят увлажненной салфеткой или тампоном: протирают сначала тыл кисти, затем ладонную поверхность, межпальцевые пространства, ногтевое ложе.


Для определения общего числа микробов в исследуемом смыве к 2 мл изотонического раствора хлорида натрия, используемого для увлажнения тампона, прибавляют еще 8 мл и тампон тщательно отмывают встряхиванием. Полученное исходное разведение 1 : 10 вносят в чашки Петри по 1 мл, заливают расплавленным и остуженным до 45°С мясо-пептонным агаром, инкубируют в термостате при 37°С и через 48 ч подсчитывают количество выросших колоний, делая перерасчет на 1 см2 исследуемой поверхности.


Для определения БГКП производят посев в среду обогащения, для чего тампон погружают в среду Кесслер или 10—20% желчный бульон. Через сутки инкубирования при 37°С делают пересев на среду Эндо. После инкубации в термостате при 37°С в течение 18—24 ч, подозрительные колонии микроскопируют, пересевают в среду Гисса с глюкозой и выдерживают при 43°С 24 ч. Затем производят учет результатов.


Для обнаружения стафилококков делают посев с тампона на желточно-солевой агар. Кроме того, в качестве среды накопления используют бульон с 6,5% хлорида натрия и бульон с 1 % глюкозы, разлитые по 0,5 мл в пробирки, куда засевают по 0,2—0,3 мл смывной жидкости. Инкубируют при 37°С в течение 24 ч, а затем делают пересев на чашки с желточным агаром. Дальнейшее исследование проводится по общепринятой методике обнаружения стафилококков. В хирургических отделениях больниц,  согласно инструкции, на предметах окружающей обстановки выявляют наличие синегнойной палочки. Для этого специальные посевы не производят, так как колонии данной палочки удается выявить на среде Эндо и других средах (по пигментообразованию). Колонии, подозрительные на синегнойную палочку, пересевают на скошенный агар, содержащий 2—5% глицерина, или маннит. На поверхности скошенного агара синегнойная палочка дает обильный рост с зеленоватым оттенком, маслянистой консистенции с характерным запахом жасмина, земляничного мыла. Выделенную культуру окрашивают по Граму, микроскопируют, определяют гемолитические свойства путем посева на чашку с кровяным агаром.


Смывы с рук хирургов для проверки стерильности производят стерильными марлевыми салфетками, которые помещают в широкогорлые пробирки с раствором нейтрализатора (вода или изотонический раствор хлорида натрия) и стеклянными бусами, встряхивают в течение 10 мин, отмывную жидкость засевают по 0,5 мл на две чашки Петри с мясо-пептонным агаром для определения общей микробной обсемененности, а марлевую салфетку помещают в 0,5% сахарный бульон. Инкубируют при 37°С в течение 48 ч. Дальнейший ход исследования зависит от характера микрофлоры (кокковая, кишечная группа ит. д.) .

 

Санитарно-бактериологическое исследование мясо-колбасных изделий.          

 

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

    Образцы вареных и копченых видов колбасСтерильные чашки Петри, скальпели, ножницы, пинцеты, весы с разновесками, ступки с пестиком, стерильный песок. Чашки Петри с питательными средами – агаром Эндо, Левина, Плоскирева, пробирки со средой Крумвиде-Олькеницкого. Стерильный физраствор в колбах по 90 мл, в пробирках по 9 мл, стерильные пипетки на 1, 10 мл, стерильные мензурки.

Колбасные изделия – продукты переработки мяса, которые употребляют в пищу без дополнительной подготовки, т.к. мясо, используемое для приготовления, подвергают специальной механической, физико-химической и термической обработке. К этим изделиям относятся фаршированные, вареные, полукопченые, варено-копченые, сырокопченые, ливерные и кровяные колбасы, мясные хлебцы, сосиски, сардельки, студни.

Колбасные изделия представляют собой благоприятную среду для развития различных микроорганизмов, вызывающих микробную порчу: термофильных молочнокислых бактерий (закисание), плесневых грибов и протеолитических бацилл (гниение). Быстро портятся варено-копченые и вареные колбасные изделия влажностью более 40-50%, особенно при нарушениях температурно-влажностного режима хранения. В меньшей степени подвержены порче сырокопченые изделия из-за низкого содержания влаги (20-30%).

Степень исходной микробной обсемененности колбасного фарша зависит от санитарно-гигиенических условий производства и соблюдения технологических режимов. В процессе приготовления колбасных изделий, мясной фарш обсеменяется различными микроорганизмами, попадающими в него из вспомогательных материалов: молочные, яичные, мучные продукты, белковые стабилизаторы, посолочные смеси (соль, сахар, нитраты), пряности, лук, чеснок и другие компоненты.

Бактериологическое исследование колбасных изделий направлено на определение количества МАФАнМ, БГКП, индикацию сальмонелл, бактерии родов Proteus, микроорганизмов порчи – в основном это дрожжи и плесневые грибы.

Отбор, подготовка проб и проведение исследования.

Пробы продуктов для микробиологического исследования отбирают раньше проб для физико-химического и органолептического исследования с соблюдением правил асептики, в стерильную посуду, с применением стерильных инструментов. Масса пробы установлена НТД на конкретный вид продукции, достаточной для проведения полного микробиологического анализа.

От кусковой продукции массой нетто до 1000 г отбирают точечные пробы ложкой, пинцетом или другими инструментами в зависимости от вида и размера кусков и помещают в посуду или упаковывают в фольгу. Пробы скоропортящихся продуктов транспортируют при температуре 50С не более 6 часов.

От кусковой продукции массой нетто более 1000 г пробы отбирают одним из следующих методов:

- отрезают или вырезают часть продукта ножом или пилой. У изделий квадратной формы разрез делают перпендикулярно к грани, продольной формы – перпендикулярно к продольной оси;

- продукт в нескольких местах режут ножом и с поверхности разреза и из глубины продукта скальпелем берут необходимое количество кусков, которые пинцетом переносят в стерильную посуду;

- срезают поверхностный слой продукта толщиной от 0,5 до 1 см ножом, при помощи буравчика или зонда и выдавливают продукт в посуду. При отборе пробы из глубины продукта его просверливают в разных местах не менее чем до половины высоты;

Каждую отобранную пробу маркируют этикетками с указанием наименование продукта, предприятия-изготовителя, номера партии, даты отбора продукта, цели микробиологического анализа, подписи лиц, отбиравших пробу. Пробы, предназначенные для исследования вне предприятия, пломбируют, опечатывают и транспортируют в лабораторию.

В зависимости от вида продукта объединенную пробу массой 50 г составляют из точечных проб следующим методом.

Колбасные изделия в оболочке, продукты из говядины, свинины, баранины помещают в эмалированный поддон, тщательно протирают спиртовым тампоном и дважды обжигают над пламенем спиртовки. Затем батоны разрезают продольно стерильным ножом на две половины, не рассекая оболочку противоположной стороны батона. Пробу отбирают из нескольких участков центральной части батона и из-под оболочки обеих его половинок.

Изделия без оболочки (мясные хлебцы, студни и др.) исследуют с поверхности и в глубине. Для этого после развертывания упаковки с каждого из исследуемых образцов делают смыв новым стерильным увлажненным ватным тампоном с тех участков продукта, с которыми могли соприкасаться руки упаковщика. Тампоны помещают в пробирки, заполненные на ¾ одной из сред: ХБ, Хейфеца или Кесслера. Для анализа глубинных участков образцы изделий без оболочки помещают на стерильный эмалированный поддон, смачивают спиртом и обжигают. Делают продольный разрез и отбирают навеску методом, указанным для колбасных изделий в оболочке. Составляют одну объединенную пробу для каждого образца в отдельности и помещают ее в предварительно взвешенную стерильную чашку Петри.

Из объединенной пробы каждого образца берут в стерильную посуду (или пергаментную бумагу) навеску массой 20 г, которую помещают в стерильный стакан гомогенизатора, добавляют 4-кратное количество стерильного физраствора и гомогенизируют в электрическом смесителе (можно магнитной мешалке). Вначале материал измельчают на кусочки при замедленной частоте вращения ножей, затем – при 15000-20000 об/мин в течение 2-3 мин.

При отсутствии гомогенизатора допускается приготовление исследуемой взвеси в ступке. 20 г продукта растирают в стерильной фарфоровой ступке с 2-3 г речного песка, постепенно приливая 80 мл стерильного физраствора.

В том и другом случае в 1 мл приготовленной взвеси содержится 0,2 г исследуемого продукта.

Взвесь 15 мин выдерживают при комнатной температуре и делают высев для определения количества МАФАнМ, БГКП, бактерий рода сальмонелла и протея, сульфитредуцирующих клостридий.

Методика определения МАФАнМ. Из каждой пробы колбасных изделий делают не менее двух различных по объему посевов, взятых с таким расчетом, чтобы на чашках выросло от 30 до 300 колоний. В одну чашку Петри вносят 0,1 г, а в другую – 0,01 г продукта.

Предварительно готовят первое 10-ти кратное разведение исследуемой взвеси. Стерильной пипеткой 5 мл исследуемой взвеси переносят в пробирку с 5 мл стерильного физраствора. Другой стерильной пипеткой содержимое пробирки тщательно перемешивают продуванием, набирают 1 мл и вносят в стерильную чашку Петри (т.е. провели посев 0,1 г продукта).

Для посева 0,01 г продукта готовят второе разведение - 1:100: для этого стерильной пипеткой тщательно перемешивают содержимое пробирки с первым разведением, набирают 1 мл и переносят в пробирку с 9 мл стерильного физраствора (теперь в 1 мл содержится 0,01 г исследуемого продукта). 1 мл такого разведения вносят в чашку Петри. Обе чашки заливают 15 мл МПА, расплавленного и охлажденного до 450С, перемешивают тщательно, чтобы выросли изолированные колонии. После застывания агара чашки помещают в термостат при 370С, через 48 ч подсчитывают общее количество колоний, выросших на поверхности и в глубине агара, умножают на степень разведения исследуемого продукта по каждой чашке и выводят среднее арифметическое результатов подсчета двух чашек с разной массой посеянного продукта.

Методика индикации БГКП. Цель индикации бактерий этой группы – проверка соблюдения режима термической обработки колбас или санитарно-гигиенических условий в процессе производства сырокопченых колбасных изделий. Исследование на БГКП проводят по общепринятой методике с использованием сред, содержащих углеводы (лактоза, глюкоза). К ним относятся среды Хейфеца, ХБ, Кода, Кесслера. БГКП ферментируют глюкозу и лактозу, поэтому в перечисленных средах образуются кислые продукты, меняющие цвет индикатора, а в среде Кесслера можно наблюдать появление в поплавках пузырьков газа.

При микробиологическом контроле колбасных изделий в производственных лабораториях можно ограничиться обнаружением БГКП без их биохимической дифференциации. Для выявления БГКП в пробирки с 5 мл среды ХБ или Хейфеца двойной концентрации вносят по 5 мл исследуемой взвеси стерильной пипеткой с широким концом. Допускается применение среды Кесслера по 10 мл. Посевы термостатируют при 370С в течение 18-20 ч. Посевы смывов, отобранных тампонами с поверхности изделий без оболочки, выдерживают при температуре 430С (для обнаружения повторного бактериального загрязнения). При росте БГКП среда ХБ окрашивается в желтый цвет, среда Хейфеца – в салатно-зеленый, на среде Кесслера в поплавках образуется газ.

Для окончательного заключения о присутствии в колбасе БГКП проводят высев со среды Кесслера (из забродивших проб) или Хейфеца (если произошло изменение цвета среды) в чашки Петри со средой Эндо (Плоскирева, Левина) и помещают в термостат при 370С на 18-20 ч.

 

 

Санитарно-бактериологическое исследование

изделий баночных консервов.

 

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

     Образцы исследуемых консервных банок. Питательные среды: горячий МПА столбиком, среда Вильсон-Блера в пробирках высоким столбиком, чашки Петри с агаром Эндо, Левина, Плоскирева, Смирнова. Стерильный физраствор в колбах по 300 мл и по 9 мл в пробирках, стаканы с делениями, мензурки, стерильные пипетки на 1 мл, 10 мл; среды обогащения и накопления для сальмонелл. Ступки с пестиком, ножницы, скальпели, пинцеты, спирт для обжигания, спиртовки, бактериологические петли, банки с дезраствором, чашки Петри со стеклянной пластинкой 6х6 см внутри чашки положенной на 2 спички для посева по Перетцу, пустые стерильные пробирки.

Консервы – пищевые продукты, предназначенные для длительного хранения, специально обработанные и герметично упакованные в тару, которая защищает их от проникновения микроорганизмов во время хранения и транспортировки.

Основным сырьем для выработки мясных баночных консервов служит мясо животных и субпродукты, которые всегда в той или иной степени обсеменены различными сапрофитными микробами, в том числе возбудителями порчи консервов (анаэробными клостридиями и термофильными бациллами), а иногда и токсигенными и патогенными микроорганизмами (токсигенные стафилококки, сальмонеллы и др.). Для выработки мясных консервов можно использовать мясо и субпродукты только от здоровых и упитанных животных. Нельзя применять сырье плохо обескровленное, загрязненное, дважды замороженное, условно годное. Степень обсеменения подготавливаемого сырья микроорганизмами находится в прямой зависимости от санитарно-гигиенических условий производства. При этом источниками обсеменения могут быть руки рабочих или оборудование, а также вспомогательные материалы (пряности, соль, сахар, жир-сырец), которые всегда содержат микроорганизмы.

Стерилизация консервов – заключительный этап технологического процесса консервирования. Под стерилизацией подразумевается различная степень нагревания продукта, приводящая к получению микробиологически стабильного консервированного продукта, не содержащего микроорганизмы, способные развиваться в нем при хранении в определенных температурных условиях. Основная цель стерилизации консервов – уничтожение патогенных и токсигенных микроорганизмов, способных вызывать порчу продукта. Режим стерилизации устанавливают в зависимости от вида консервов, для мясных консервов это 112-1200С. Однако, несмотря на воздействие высоких температур, в консервах могут сохраняться жизнеспособные микробные клетки, т.е. не всегда достигается полная стерилизация всех банок.

Эффективность стерилизации консервов зависит не только от продолжительности и температуры нагревания, но и количественного состава микрофлоры, рН среды, содержания в нем жира, поваренной соли и сахара.

Споры различных видов спорообразующих микроорганизмов обладают неодинаковой устойчивостью к высоким температурам. Так, споры многих мезофильных аэробных бацилл отмирают уже при 1000С, тогда как споры Bac.subtilis могут сохранять жизнеспособность при 1300С. Споры анаэробных микроорганизмов отмирают при высоких температурах медленнее, чем споры аэробов.

В большой степени на результаты стерилизации влияет количественный состав микрофлоры, чем выше начальная микробная обсемененностьконсервов, тем больше времени требуется для полного уничтожения микроорганизмов и тем больше их может выжить при нагревании. Кислая среда ускоряет коагуляцию белков и отмирание микроорганизмов, а также вызывает снижение термоустойчивости вегетативных клеток и их спор.

Микроорганизмы, которые в процессе стерилизации консервов, сохранили свою жизнеспособность, принято называть остаточной микрофлорой. Состав остаточной микрофлоры стерилизованных консервов, как правило, представлен споровыми микроорганизмами. Наличие в готовых консервах жизнеспособных клеток бесспоровых бактерий всегда указывает на нарушение температурного режима, в результате которого стерилизация оказалась недостаточной. В таких случаях кроме спорообразующих микробов в консервах обнаруживают стафилококки, кишечную палочку и протей.

В соответствии с положением о порядке санитарно-технического контроля на производственных предприятиях, в розничной торговле и на предприятиях общественного питания все консервы в зависимости от состава сырья, термической обработки и величины рН подразделяют на 6 групп - (А, Б, В, Г, Д, Е):

группа А – полные консервы: консервы из говядины, свинины, конины, мяса птицы с растительными наполнителями или без них, простерилизованные в автоклавах при 110-1200С, со сроком хранения от 9 месяцев до 2 лет при температуре не выше 300С.

группа Д - полуконсервы (ветчина, бекон, сосиски) стерилизованные при 100-1100С. Их безопасность и сохранность гарантируются при хранении при температуре от 2 до150С.

группы Б, В, Г, Е – растительные консервы (овощи, фрукты, плодово-ягодные компоты, соки).

Особая группа консервов - пресервы – пастеризованные консервы производят из говядины, свинины, мяса птицы, рыбы, которые подвергают тепловой обработке при температуре не выше 1000С, а в случае асептического консервирования – при 1300С. Сохранность таких консервов гарантируется хранением при температуре не выше 50С.

Правила отбора проб.

Для контроля качества консервов от партии отбирается три единицы потребительской тары для продукции вместимостью до 1 л включительно и одна единица, если вместимость - больше 1 л. Образцы консервных банок направляют в лабораторию с сопроводительным документом, в котором указывается дата и показатели, которые должны быть определены, размеры партии, от которой отобран средний образец, сорт и дата выработки продукта, должность и фамилия лиц, отобравших образец.

Доставленные образцы осматривают и проверяют герметичность по следующей методике. Банки освобождают от этикеток, помещают в один ряд в предварительно нагретую до кипения воду, воду берут в 4-кратном количестве по отношению к массе банок. Слой воды над банками должен быть не менее 3 см. Появление струйки пузырьков указывает на негерметичность. Банки выдерживают не менее 5-7 мин, сначала на дне, потом переворачивают на крышку. Для бактериологического исследования используют только герметичные банки.

В зависимости от явных и скрытых дефектов различают физический, химический и микробиологический брак. Дефектами внешнего вида тары с фасованной в нее продукцией считают видимые невооруженным глазом признаки не герметичности – пробоины, подтеки или следы продукта, вытекающего из банки, а также бомбаж – вздутие консервной банки. К дефектам консервированного продукта относятся видимые невооруженным глазом признаки развития микроорганизмов, такие как брожение, заплесневение.

Перед микробиологическим анализом банки подвергают термостатированию, но только герметично укупоренные, бездефектные по внешнему виду, предназначенные для определения промышленной стерильности. Консервы, предназначенные для выявления ботулинических токсинов, бомбажные, с признаками микробиологической порчи и негерметичные, термостатированию не подлежат.

Для проявления жизнедеятельности МАФАнМ консервы термостатируют при 30-370С в таре до 1 л включительно, не менее 5 суток, а свыше 1 л – не менее 7 суток. Для термофильных микроорганизмов – термостатируют в любой таре не менее 3 суток. Ежедневно консервы осматривают. При появлении дефектов банки удаляют из термостата, выдерживают при комнатной температуре 24 часа и, если консервы принимают прежний вид, то их считают бездефектными и продолжают термостатирование. По истечении времени инкубирования консервы извлекают из термостата и оставляют при комнатной температуре на сутки. Отмечают дефекты тары видимые невооруженным глазом, признаки развития микроорганизмов в самом продукте в стеклянных банках (брожение, плесневение), в металлической таре - бомбаж.

Подготовка к микробиологическому исследованию.

Банки тщательно моют теплой водой и вытирают. Затем крышку банки протирают смоченным в спирте тампоном, фламбируют и вскрывают консервным ножом. Проводят органолептическое исследование: определяют внешний вид, цвет, запах и состояние содержимого. Органолептические признаки специфичны для каждого вида консервов, они должны отвечать требованиям стандартов и технических условий.

Из каждой консервной банки отбирают одну или несколько навесок, предназначенных для непосредственного высева и приготовления последовательных разведений для проведения всех видов исследования. Навеску для посева отбирают весовым или объемным методом после вскрытия банки консервов в условиях исключающих микробное загрязнение, в образце должны быть представлены все компоненты и в том же соотношении, что и в продукте.

 

Вирусные гепатиты А и Е

 

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

Вирус гепатита А

Вирус гепатита А относится к семейству пикорнавирусов, роду энтеровирусов.

Вирус гепатита А по морфологии сходен с другими представителями рода энтеровирусов. Геном образует однонитевая молекула +РНК; он содержит три основных белка. Не имеет суперкапсидной оболочки.

Антигенная структура: имеет один вирусспецифический антиген белковой природы.

Вирус обладает пониженной способностью к репродукции в культурах клеток. Репродукция вируса не сопровождается цитопатическим действием.

Вирус устойчив к действию физических и химических факторов.

Основной механизм передачи вируса гепатита А – фекально-оральный. Больной выделяет возбудитель в течение 2—3-й недель до начала желтушной стадии и 8—10 суток после ее окончания. Вирус патогенен только для человека.

Вирус гепатита А попадает в организм человека с водой или пищей, репродуцируется в эпителии слизистой оболочки тонкой кишки и регионарных лимфоидных тканях. Затем возбудитель попадает в кровоток с развитием кратковременной вирусемии. Максимальные титры вируса в крови выявляют в конце инкубационного и в преджелтушном периодах. В это время возбудитель выделяется с фекалиями. Основная мишень для цитопатогенного действия – гепатоциты. Репродукция вируса в их цитоплазме приводит к нарушению внутриклеточных метаболических процессов и гибели клеток. Цитопатический эффект усиливают иммунные механизмы, в частности NК-клетки, синтез которых индуцируется вирусом.

Поражение гепатоцитов сопровождается развитием желтухи и повышением уровня трансаминаз. Далее возбудитель с желчью попадает в просвет кишечник и выделяется с фекалиями, в которых отмечается высокая концентрация вируса.

Вирус гепатита А вызывает развитие острого высококонтагиозного заболевания, который может протекать субклинически или давать типичные клинические формы.

После перенесения клинически выраженной или бессимптомной инфекции формируется пожизненный гуморальный иммунитет.

Лабораторная диагностика:

1) определение содержания желчных пигментов и аминотрансфераз в сыворотке;

2) культивирование на лейкоцитарных или органных культурах;

3) ИФА и метод твердофазного РИА – для выявления антител (IgМ), которые появляются в сыворотке крови уже в конце инкубационного периода и сохраняются в течение 2–3 месяцев после выздоровления. С середины желтушного периода вырабатываются IgG, которые сохраняются пожизненно;

4) молекулярно-генетические методы – обнаружение РНК-вируса в ПЦР.

Лечение: средства специфической противовирусной терапии отсутствуют, лечение симптоматическое.

Специфическая профилактика: убитая вакцина на основе штамма СR 326

 

Вирусный гепатит Е 

 вирусная инфекция из условной группы фекально-оральных гепатитов, характеризующаяся поражением печени, острым циклическим течением и тяжёлыми проявлениями у беременных.

Краткие исторические сведения

Вирусный гепатит Е выделен из группы гепатитов «ни А, ни В» на основе маркерной диагностики, доказательств фекально-орального механизма и преимущественно водного пути передачи, полученных при ретроспективном анализе (1980) крупной водной вспышки в Индии, наблюдавшейся в 1955 г. Позднее М.С. Балаян с соавт. (1982) выявил вирусоподобные частицы в фекалиях больного вирусным гепатитом Е и подтвердил самостоятельность данной нозологической формы в опыте самозаражением.

Этиология

Возбудитель - РНК-геномный вирус, условно включённый в род Calicivirus, хотя в генетическом отношении он имеет существенные различия. Вирионы округлой формы, лишены суперкапсида. В целом вирусный гепатит Е менее устойчив, чем вирусный гепатит А. Он хорошо сохраняется при температуре - 20 °С и ниже. Быстро разрушается при замораживании-оттаивании, под действием хлорсодержащих или иодсодержащих дезинфекционных средств.

Эпидемиология

Резервуар и источник инфекции - человек, больной или носитель. Период контагиозности источника точно не установлен, вероятно, он аналогичен таковому при вирусном гепатите А. Вирус обнаруживают в фекалиях в ранние сроки болезни в 15% случаев при лёгких и среднетяжёлых формах; при тяжёлом течении его обнаруживают почти у 50% больных. Доказана патогенность вирусного гепатита Е для шимпанзе, свиней и других животных.

Механизм передачи - фекально-оральный, путь передачи - преимущественно водный. Имеются данные о распространении возбудителя и контактно-бытовым путём. Предполагают возможность заражения вирусным гепатитом Е при употреблении в пищу сырых моллюсков. В пользу воды как главного фактора передачи инфекции свидетельствуют низкая очаговость, возникновение массовых заболеваний, связанных с сезонами дождей и с высоким стоянием уровня грунтовых вод.

Естественная восприимчивость людей высокая, особенно женщин в III триместр беременности. Относительно редкое поражение детей объясняют преобладанием у них стёртых субклинических форм над манифестными, что затрудняет их регистрацию. Имеются достаточные основания полагать, что после перенесённого заболевания формируется напряжённый иммунитет, сохраняющийся, видимо, на протяжении всей жизни переболевшего.

Основные эпидемиологические признаки. Вирусный гепатит Е широко распространён в странах с тропическим и субтропическим климатом, а также в среднеазиатском регионе. Вирусный гепатит Е эндемичен на территориях с крайне плохим водоснабжением населения, характеризующимся неудовлетворительным качеством воды, опасной в эпидемическом отношении, при выраженном её дефиците (территории риска). Принято считать, что вирусным гепатитом Е ежегодно заболевает около 1 млн человек, а в странах Азии на его долю приходится более половины всех случаев острого гепатита. Крупные водные вспышки (с числом заболевших 15-20 тыс.) имели место в Индии, Бирме, Алжире, Непале, республиках Средней Азии бывшего СССР (Туркмения, Таджикистан, Узбекистан, Киргизия). Поскольку отдельной регистрации вирусного гепатита Е не проводится, истинных величин заболеваемости и точный нозоареал определить очень трудно. Стойкие очаги вирусного гепатита Е существуют в Центрально-Азиатском регионе бывшего СССР, преимущественно в низменных и плоскогорных районах. Наряду с крупными вспышками регистрируют и спорадические заболевания. Преимущественно водный путь заражения определяет ряд эпидемиологических особенностей вирусного гепатита Е: взрывообразный характер заболеваемости, своеобразную возрастную структуру заболевших с преимущественным поражением лиц 15-19 лет, незначительную очаговость в семьях, наличие повторяющихся подъёмов заболеваемости в эндемичных районах с интервалом в 7-8 лет, резко выраженную территориальную неравномерность распространённости заболеваемости, сезонное повышение заболеваемости в летне-осенние месяцы.

Патогенез

До конца не изучен. Заражение происходит при употреблении контаминированной воды или пищи. Вирус, видимо, избирательно поражает гепатоциты, что ведёт к нарушению функции печени и развитию интоксикации. При вирусном гепатите Е значительно чаще, чем при вирусном гепатите Е, встречают тяжёлые формы заболевания, в ряде случаев приводящие к летальному исходу.

 

 

                                     Вирусные гепатиты В и С

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

Вирус гепатита В

Относится к семейству Hepadnaviridae. Это икосаэдральные, оболочечные ДНК-содержащие вирусы, вызывающие гепатиты у различных животных и человека. Геном образует неполная (с разрывом одной цепи) кольцевая двухнитевая молекула ДНК. В состав нуклеокапсида входят праймерный белок и ДНК полимераза, ассоциированная с ДНК.

Для эффективной репликации необходим синтез вирусиндуцированной обратной транскриптазы, так как вирусная ДНК образуется на матрице РНК; в динамике процесса вирусная ДНК интегрирует в ДНК клетки.

Синтез ДНК и сборка вируса осуществляются в цитоплазме инфицированной клетки. Зрелые популяции выделяются отпочковыванием от клеточной мембраны.

Антигенная структура:

1) НВsАг (включает в себя два полипептидных фрагмента):

а) полипептид preS1 обладает выраженными иммуногенными свойствами; полученный методом генной инженерии полипептид может использоваться для приготовления вакцинных препаратов;

б) полипептид preS2 (полиглобулиновый рецептор, обуславливающий адсорбцию на гепатоцитах; способен взаимодействовать с сывороточным альбумином, в результате чего последний превращается в полиальбумин);

2) НВcorАг (является нуклеопротеином, представлен единственным антигенным типом; его обнаруживают только в сердцевине вируса);

3) НВeАг (отщепляется от НВcorАг вследствие прохождения его через мембрану гепатоцитов).

Заражение происходит при инъекциях инфицированной крови или препаратов крови; через загрязненные медицинские инструменты, половым путем и интранатально, возможно внутриутробное инфицирование.

Место первичной репликации вируса неизвестно; размножение в гепатоцитах наблюдают только через 2 недели после инфицирования. При этом репликативный цикл не сопровождается гибелью гепатоцитов. Во второй половине инкубационного периода вирус выделяют из крови, спермы, мочи, фекалий и секрета носоглотки. Патологический процесс начинается после распознавания вирусиндуцированных антигенов на мембранах гепатоцитов иммунокомпетентными клетками, т. е. он обусловлен иммунными механизмами.

Клинические проявления варьируются от бессимптомной и безжелтушной форм до тяжелой дегенерации печени. Течение гепатита В более тяжелое, с постепенным началом, длительным инфекционным циклом, более высоким уровнем летальности, чем при гепатите А. Возможна хронизация процесса.

Лабораторная диагностика:

1) выявление вирусных антигенов иммунофлюоресцентным методом; материал – фекалии, кровь и биопсийный материал печени;

2) серологические исследования включают в себя определение антигенов и антител с помощью реагентов – НВsАг, НВeАг; антигенов к НВsАг, НВcorАг, НВeАг и IgM к НВcorАг;

3) определение ДНК-полимеразы.

Лечение: средства специфической лекарственной терапии отсутствуют, лечение в основном симптоматическое.

Специфическая профилактика:

1) пассивная иммунизация – вводят специфический иммуноглобулин (HBIg);

2) активная иммунизация (рекомбинантные вакцины, полученные методом генной инженерии).

Иммунизация показана всем группам риска, включая новорожденных.

 

Вирусный гепатит С

 

Гепатит С. Таксономия.
Относится к роду Hepacivirus семейству Flaviviridae.

Гепатит С. Морфология.
Имеет всего 1 ген, в котором зашифрована структура 9 белков. Эти белки участвуют в проникновении вируса в клетку, в создании и сборке вирусных частиц, называют структурными, стальные выполняют разные ферментные функции. По строению вирион сходен с вирусом клещевого энцефалита: 30-50нм в диаметре, суперкапсид. Белок нуклекапсида, представленный одной нитью РНК, заключенной в белковую оболочку, не только выполняет важную функцию в сборке вириона и регуляции синтеза РНК, но, что весьма усложняет ситуацию с HBC, может нарушать иммунный ответ инфицированного.

Гепатит С. Резистентность.
Чувствителен к эфиру, УФ-лучам, детергентам.

Гепатит С. Патогенез и клиника. 
Вирус передается парэнтериально, фиксируется в печени, репродукция происходит преимущественно в гепатоцитах, вызывая их гибель. Однако, не исключено поражение других клеток, например иммунокомпетентных.

Репродукция вируса происходит в гепатоцитах, цикл репродукции заканчивается лизисом зараженной клетки. В геноме вируса с высокой частотой происходят мутации в участках, ответственных за синтез поверхностных белков. Таким образом, вирус уходит из-под иммунологического контроля организма.

Продолжительность инкубационного и продромального периодов сходна с таковыми при гепатите В. Протекает, в основном, в бессимптомной или стертой формах. Около 80% случаев инфицирования перетекает в хроническую форму. Исход хронической инфекции неблагоприятен (цирроз, гепатоцеллюлярная карцинома).

Гепатит С. Мутации и генотипы. 
В геноме вируса часто происходят мутации, причем преимущественно в участках, ответственных за синтез оболочных белков-антигенв. Антитела больного не распознают такие измененные вирусные антигены и вирус, таким образом, уходит из-под иммунного контроля и постепенно разрушает печень.

HCV имеет до 6 разных генотипов и несколько десятков субтипов, различающихся по чувствительности к интерферонам, географической распространенности, интенсивности вирусемии.

Гепатит С. Лабораторная диагностика.  
Осуществляется с помощью определения антител с помощью ИФА. Более информативным методом является обнаружение вирусной РНК в сыворотке крови или биоптате печени с помощью полимеразной цепной реакции.

Диагностика также осуществляется с помощью ПЦР (вирусный геном определяется уже в инкубационном периоде).

 

                                  

     Онкогенные вирусы.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

      Впервые этиологическая роль вирусов бы­ла продемонстрирована в 1910 г. П. Раусом на примере саркомы кур, хотя гипотеза о ви­русной этиологии опухолей высказывалась и ранее. В 30-е годы XX в. была показана роль фильтрующих агентов в развитии папилло­мы и рака кожи у кроликов, рака молочной

железы у мышей, лимфомы у цыплят. В 1946 г. российский вирусолог Л. А. Зильбер опубликовал монографию «Вирусная теория происхождения злокачественных новооб­разований», в которой изложил свою ви-русогенетическую теорию происхождения опухолей. Основу этой теории составляет постулат о необходимости тесного взаи­модействия геномов вируса и клетки для последующей ее трансформации. Благодаря развитию молекулярной биологии, вирусо-генетическая теория онкогенеза в начале 70-х годов XX в. нашла экспериментальное подтверждение.

В настоящее время установлена связь между вирусной инфекцией и последующей транс­формацией клетки для вирусов, входящих в следующие семейства:

РНК-содержащие: семейство Retroviridae.

ДНК-содержащие: семейства Papillomavi-ridae, Polyomaviridae, Adenoviridae 12, 18, 31, Hepadnaviridae, Herpesviridae, Poxviridae

Наиболее хорошо изучен механизм вирус­ного онкогенеза у представителей РНК-со-держащих вирусов семейства Retroviridae.

РНК-содержащие онкогенные вирусы

Семейство Retroviridae включает 7 родов (см. разд. 17.1.11).

Онковирусы являются сложноорганизо-ванными вирусами. Вирионы построены из сердцевины (диаметр 70—80 нм), окружен­ной липопротеиновой оболочкой с шипами. Размеры и формы шипов, а также локализа­ция сердцевины служат основой для подраз­деления вирусов на 4 морфологических типа (А, В, С, D), а также вирус бычьего лейкоза.

Большинство онкогенных вирусов отно­сится к типу С. Этот тип распространен среди рыб, пресмыкающихся, птиц, млекопитаю­щих, включая человека. К типу В относятся вирусы, вызывающие рак молочной железы у мышей, а некоторые онковирусы обезьян принадлежат к типу D.

Капсид онковирусов построен по кубичес­кому типу симметрии. В него заключены нук-леопротеин и фермент ревертаза (обратная транскриптаза). От наличия этого фермента, осуществляющего обратную (лат. retro — об­ратный), и произошло название семейства. Ревертаза обладает способностью транскри-

бировать ДНК как на матрице РНК, так и ДНК, а также нуклеазной активностью.

Геном представлен двумя идентичными по­зитивными цепями РНК, т. е. геном обладает диплоидностью. Обе молекулы РНК связаны на 5'-конце водородными связями. С 5'-кон-цом каждой цепи связана тРНК клеточного происхождения, которая служит затравкой при транскрипции генома.

Геном состоит из структурных и регуля-торных генов. Последовательность структур­ных генов от 5'-конца к З'-концу следующая: gag—pol—env.

Gag кодирует синтез группоспецифических антигенов капсида, основными из которых являются белки капсида с р27—рЗО. Pol ко­дирует ревертазу. Env кодирует белки шипов оболочки.

Структурные гены с двух сторон ограниче­ны длинными концевыми повторами, полу­чившими название LTR {long terminal repeat, англ.), которые выполняют регуляторную функцию. В их состав входят сайты, связы­вающие затравку, которой является тРНК, и клеточные полимеразы. Кроме того, имеется ген-трансактиватор, являющийся усилителем транскрипции.

По краям LTR ограничены повторяющими­ся последовательностями, которые представ­ляют участки узнавания в процессе интегра­ции провируса в геном клетки.

Культивирование вирусов. Не культивируют­ся на куриных эмбрионах, культивируются в организме чувствительных животных, а также культурах клеток.

Репродукция вирусов. Онковирусы прони­кают в клетку путем эндоцитоза. После осво­бождения из вакуоли нуклеокапсида начина­ет функционировать ревертаза. Этот процесс включает 3 этапа:

  • синтез ДНК, на матрице РНК, при ис­пользовании тРНК в качестве затравки;
  • ферментативное расщепление матричной РНК;
  • синтез комплементарной нити ДНК на матрице первой нити ДНК.

Все три этапа осуществляются ревертазой. Благодаря наличию на LTR инвертированных повторов, линейная двухцепочечная ДНК замы­кается в кольцо и интегрирует в ДНК клетки.

Транскрипция участков хромосомы, соот­ветствующих геному провируса, осуществляет­ся с помощью клеточной РНК-полимеразы 2.

Существуют две большие группы онковиру­сов: эндогенные и экзогенные.

Эндогенные онковирусы являются состав­ными элементами генома всех органов и тка­ней организма человека и животных и переда­ются потомству от одного поколения другому, т. е. «вертикально», подобно обычным кле­точным генам. Эндогенные онковирусы не являются онкогенными для представителей того вида животного, в клетках которого они находятся в виде постоянного генетического элемента.

Экзогенные онковирусы распространяются «горизонтально» от одной особи другой в форме вирионов.

Механизм онкогенеза, вызываемого онко­вирусами, связан с функционированием опс-генов, которые имеются в геноме всех клеток человека и животных. В нормальных здоро­вых тканях этот onc-ген находится в неактив­ном состоянии, в так называемой форме про-онкогена. В настоящее время известно более двух десятков onc-генов, функционирование которых приводит к трансформации клетки. Например, src-ген связан с развитием сарко­мы Рауса у кур, ras-ген опосредует развитие саркомы у крыс.

Включение в геном клетки ДНК-провируса может приводить к активации onc-гена, ре­зультатом чего будет развитие трансформации клетки. Кроме того, в процессе исключения ДНК-провируса из хромосомы клетки опс-ген может встроиться в вирусный геном и в составе вирусного генома попасть в новые клетки в активном состоянии.

Последовательность одного и того же про-тоонкогена может определять трансформи­рующую активность онковирусов разных жи­вотных.

Активация протоонкогена может быть результатом увеличения транскрипци­онной активности вследствие действия трансактиватора, расположенного на LTR генома провируса, а также результатом пе­рестройки генетического материала, как следствие включения провируса в геном клетки.

Помимо онковирусов активацию протоон-когена могут вызвать мутагены, подвижные генетические элементы.

Онковирусы чувствительны к эфиру, де­тергентам, формалину, инактивируются при температуре +56 °С. Устойчивы к УФ-лучам и низким температурам.

 

 

                                           Вирус бешенства.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

      Бешенство (лат. Rabies, Lyssa, Hydrophobia) известно давно как заболевание диких и домашних животных. Вирус бешенства избирательно поражает клетки центральной нервной системы, поэтому заболевание сопровождается возбуждением, судорогами, а затем наступают параличи.


Морфология и биологические свойства. Вирус бешенства имеет форму палочки размером 100—150 нм, покрыт оболочкой. В цитоплазме пораженных клеток образует включения, которые были описаны в 1892 г. Бабешом, а в 1903 г. — Негри. Их называют тельцами Бабеша— Негри. Форма включений сферическая, величин 1—20 мкм, по Романовскому окрашиваются в красны цвет. Обнаружение их в клетках аммонова рога имеет диагностическое значение.


Вирус культивируется в мозговой ткани мышиного эмбриона, при заражении в желточный мешок или мозг куриных эмбрионов, а также в организме кролика.

Различают два типа вируса бешенства: уличный вирус, который выделяют от больных людей и животных, и фиксированный вирус, полученный Пастером при длительных пассажах уличного вируса через мозг кролика (вирус фикс). Вирус фикс вызывает при заражении кроликов паралич через строго фиксированный, сокращенный инкубационный период в 3—7 дней. Он непатогенен для человека, собак и других животных, не выделяется со слюной животных и человека, редко обнаруживается в периферически нервах и не образует телец Бабеша — Негри. Фиксированный вирус, потерявший вирулентность для человека животного, используют при изготовлении антирабически вакцин. В механизме иммунитета, возникающего поел введения вакцин против бешенства, наибольшее значение имеет феномен интерференции вирусов. Сущность этого феномена заключается в способности одного вида вируса, внедрившегося в клетку хозяина, задерживать репродукцию другого вида вируса, попавшего в эту же клетку позже. Фиксированный вирус, имеющий большую тропность к нервной ткани, быстро размножается ней и препятствует развитию уличного вируса.


Устойчивость. Вирус бешенства малоустойчив в внешней среде: быстро погибает при нагревании, под действием солнечных лучей и дезинфицирующих веществ (формалин, фенол, сулема). В 50% глицерине может сохраняться при—20—40°С несколько лет.


Патогенность. К уличному вирусу бешенства восприимчивы все теплокровные дикие и домашние животные, в меньшей степени — птицы. У лабораторных животных (кролики, белые мыши, морские свинки) возникают паралитические формы бешенства при различных путях заражения.


Патогенез и клиника. В организм человека вирус бешенства проникает со слюной при укусах бешеных животных или ослюнении кожи человека больным животным. По стволам периферических нервов вирус достигает центральной нервной системы и поражает ее. Инкубационный период при бешенстве чаще длится от 1 до 3 мес и висит от локализации укуса. При укусах лица и шеи от период короче (от 10 дней до года) . Заболевание начинается с появления боли на месте укуса, чувства страха, беспокойства, раздражительности. При попытках налиться и даже при виде воды появляются судороги глотательных мышц, поэтому заболевание бешенством называют водобоязнью, или гидрофобией. Больной возбужден, сознание нарушено, наблюдаются судорожные припадки. Больные могут кусаться, бросаться на медицинский персонал. Через несколько дней возникают параличи мышц конечностей, лица, дыхательной мускулатуры и наступает смерть. Продолжительность заболевания 6— 7 дней.


Вирусологическая диагностика. Методы прижизненной индикации вируса бешенства не разработаны. Диагноз ставится на основании типичной клинической картины заболевания. После смерти в пораженных клетках мозга находят тельца Бабеша — Негри. Специфический антиген можно обнаружить также методом флюоресцирующих антител. Вирус можно выделить путем заражения лабораторных животных: кроликов, белых мышей и морских свинок, при вскрытии которых в клетках пораженного мозга обнаруживают включения Бабеша — Негри.


Профилактика и лечение. С целью специфической профилактики вводят антирабическую вакцину, впервые предложенную Пастером. Вакцины готовят из взвеси мозговой ткани кроликов, овец или сосунков белых крыс,  зараженных фиксированным вирусом бешенства. Существуют различные типы вакцин, отличающиеся между собой количеством и качеством консервантов. Вакцина Ферми содержит 1% фенола, вакцина Семпля — 0,25% его, вакцина Филлипса — глицерин. В последние годы предложена живая антирабическая вакцина из вируса, который культивируется на эмбрионах птиц (вакцина Флери). Действие вакцины основано на явлении интерференции вирусов. Вакцинации подвергаются все люди, укушенные или ослюненные больными или подозрительными на бешенство животными. Противопоказаний к применению вакцины не имеется, так как это единственный способ спасения зараженных. Обычно прививки делают многократно в течение 12—30 дней и более в зависимости от тяжести укуса, его локализации, времени, прошедшего после укуса. Вакцину вводят подкожно в область живота.

 

Прививки необходимо начинать как можно раньше после укуса и проводить согласно существующей инструкции. Иммунитет, возникающий после прививки, сохраняется до 6 мес. Людям при появлении признаков заболевания прививки не делают. При тяжелых укусах в области головы, шеи одновременно с антирабической вакциной вводят гамма-глобулин или антирабическую сыворотку. За подозрительными животными ведут наблюдение в течение 7 дней и, если признаков заболевания не наблюдается, их считают здоровыми. Эффективные методы лечения бешенства отсутствуют.

 

 

 

 

 

                                             Вирусы. ВИЧ-инфекция.

 

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

    Вирус иммунодефицита человека относится к сложным вирусам, то есть имеет суперкапсид сферической формы, образованный двойным липидным слоем с гликопротеиновыми "шипами". "Шипы" образованы гликопротеином gp 160 (gp - glycoprotein; 160 - молекулярная масса белка в килодальтонах), состоящим из 2 субъединиц.

gp 120 - высокоиммуногенный белок, содержащий консервативные и гипервариабельные участки, а также область, связывающую молекулу CD4 Т-лимфоцитов (рецептор Т-хелперов). Белок gp 120 расположен на поверхности вируса.

gp 41 - пронизывает липидный бислой насквозь и нековалентно связан с gp 120. Он обусловливает слияние вируса с Т-лимфоцитом (после того как gp 120 связался с CD4). Кроме того, gp 41 может опосредовать проникновение вируса в клетки с дефицитом рецепторов CD4.

Под суперкапсидом расположен матриксный белок p 17 (p - протеин).

Глубже всего располагается сердцевина, имеющая форму усеченного цилиндра - это нуклеокапсид.

Капсид образует белок p 24.

Внутри капсида находится геном вируса, представленный двумя идентичными нефрагментарными нитями РНК+, соединенными вблизи их 5' концов.

Белки р9 и р7 связывают нуклеиновые кислоты (структурные белки);

B состав ВИЧ входят следующий ферменты:

  • обратная транскриптаза, состоящая из 3 доменов - обратной транскриптазы, РНК-азы и ДНК зависимой ДНК-полимеразы;
  • эндонуклеаза;

Собственно геном вируса состоит из 9 генов, часть которых перекрывается между собой и имеет экзон-интронную структуру. 9 генов вируса контролируют синтез 9 структурных и 6 регуляторных белков.

Механизм взаимодействия вируса иммунодефицита с клеткой

Проникнув в организм,

вирус в первую очередь атакует клетки, содержащие специфический для него рецептор CD4. В большем количестве его имеют Т-хелперы, в меньшем - макрофаги и моноциты.

Инфекционная фаза репродукции  Сначала вирус распознает CD4 рецепторы с помощью своего белка gp 120.

Далее следует рецепторопосредованная адсорбция вируса на клетке.

Потом образуется окаймленная ямка, окаймленный пузырек, рецепторсома.

Далее происходит раздевание вириона - мембрана вириона сливается с мембраной рецепторсомы, и нуклеокапсид, освобожденный от суперкапсида, выходит в цитоплазму.

На пути к ядру нуклеокапсид разрушается, и высвобождается геномная РНК и ассоциированные с ней белки.

РНК с ферментами проникают в ядро.

Собственно фаза репродукции.  Обратная транскриптаза синтезирует на вирионной РНК минус цепь ДНК:  РНК+ => ДНК- РНК+

РНК-аза Н разрушает вирионную РНК:  ДНК- РНК+ => ДНК-

Вирусная ДНК-полимераза синтезирует плюс цепь ДНК:  ДНК- => ДНК- ДНК+

На обоих концах этой двухцепочечной ДНК находятся длинные концевые повторы нуклеотидов (LTR - long terminal repeat).

Какое-то время ДНК-провирус может находиться в неактивной форме, но рано или поздно с помощью своей эндонуклеазы он встраивается в хромосому клетки - мишени.

Интегрированный провирус находится в неактивном состоянии до тех пор, пока данный Т-лимфоцит не будет активирован микробными антигенами или другими иммунокомпетентными клетками.

При активации и пролиферации Т-лимфоцитов и моноцитов в большом количестве вырабатывается ДНК-связывающий белок.

ДНК-связывающий белок связывается с определенными последовательностями клеточной ДНК и сходными последовательностями LTR ДНК-провируса.

Таким образом индуцируется транскрипция как клеточной ДНК, так и ДНК провируса. При этом ДНК провируса переходит из неактивного состояния в активное, а инфекция - из персистентной в продуктивную.  Пребывание вируса в неактивном состоянии может продолжаться очень долго. С момента инфицирования вирусом клетки начинается период вирусоносительства, который может продолжаться 10 и более лет. С момента активации вируса начинается сама болезнь.

Механизм взаимодействия с клеткой. Патогенез ВИЧ-инфекции

Вирусы являются патогенами внутриклеточными, каждый вирус имеет тропность к определенному типу клеток. Его тропизм определяется наличием на клетке-мишени рецептора для данного вируса и возможностью генома вируса встроиться в геном клетки. Рецепторы могут быть на клетках различных типов. Рецепторную функцию выполняют лиганды: белки, липиды, углеводные компоненты белков и липидов. Они локализованы на плазматической мембране обеспечивают проникновение в клетку гормонов, питательных веществ, факторов роста и регуляции и т.п.

Рецепторы имеют общую структурную характеристику, то есть состоят из участка, расположенного вне клетки, локализованного внутримембранно участка, и участка, погруженного в цитоплазму.

Рецепторами для ВИЧ являются дифференцировочный антиген CD4 и не зависящие от наличия CD4 компоненты. CD4 - гликопротеид с молекулярной массой 55 000, по своему строению имеющий гомологии с определенными участками иммуноглобулинов. Фиксация вируса через gp120 ВИЧ-1 с мембранным рецептором CD4 клетки хозяина блокирует восприятие сигналов от анти-генпрезентирующих клеток. Дальнейшая репликация вируса приводит к гибели клеток, нарушению выполняемой ими функции и последующему развитию иммунодефицита.

В человеческом организме имеется ряд клеток, имеющих рецепторы для ВИЧ (CD4+ лимфоциты, CD8+ лимфоциты, дендритные клетки, моноциты, эозинофилы, мега-кариоциты, нейроны, микроглия, сперматозоиды), и в случае проникновения вируса наблюдается цитопатический эффект во многих из них.

Кроме основного рецептора - CD4, имеется еще ряд корецепторов, в частности, хемокиновые рецепторы, необходимые для проникновения ВИЧ в клетку. Хемокины - полипептиды, вызывающие движение клеток в определенной направленности. У человека выделено около 40 отдельных подобных белков, их подразделили на альфа- и бета-хемокины. В лаборатории Р. Галло в 1995 году были выделены хемокины из CD8-лимфоцитов и два белка из макрофагов. Они блокируют инфицирование CD+ мононуклеаров макрофаготропными, но не лимфотропными вариантами ВИЧ-1.

Таким образом, выделены белки - хемокины, блокирующие проникновение ВИЧ в макрофаги с антигеном CD4, и белки - корецепторы, способствующие инфицированию. При этом корецепторы - это рецепторы для хемокинов, но их использует ВИЧ в качестве рецептора, с помощью которого проникает внутрь клетки.

Вирус оказывает разнонаправленные действия не только на Т-лимфоциты, но и на клетки киллеры. Активность последних по мере прогрессирования заболевания неуклонно снижается, т.е. организм становится по мере прогрессирования заболевания всё менее устойчив к воспалительным процессам. Дефицит ИЛ-2 и γ-интерферона даже при нормальном количестве NK-клеток ведет к снижению функциональной активности их у больных ВИЧ-инфекцией.

Выделено два типа CD4+клеток: Т-хелперы-1 (Th1) и Т-хелперы-2 (Th2). Тh1 продуцируют цитокины, стимулирующие клеточный иммунитет, а Тh2 - цитокины, усиливающие антителогенез. Соотношение Тh1 и Тh2 взвешенно и конкурентно; суперэкспрессия цитокинов одного типа клеток ведет к супрессии другого. У больных ВИЧ-инфекцией идет угнетение Тh1, чем обеспечиваются и вирусная патология, и онкогенез.

                                                    Вирус ветряной оспы.

 

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

     Оспа ветряная – высококонтангиозное острое вирусное заболевание с воздушно-капельным путем передачи, возникающее преимущественно в детском возрасте и характеризующееся умеренной интоксикацией, лихорадочным состоянием, везикулезной сыпью на коже и слизистых.

Этиология. Возбудитель ветряной оспы относится к вирусам группы герпеса, содержит ДНК, имеет сферическую форму и диаметр 150—200 нм, неустойчив во внешней среде. Быстро погибает под действием высоких температур, ультрафиолетового облучения, эфира. Хорошо переносит замораживание. Вирус отличается летучестью и с потоком воздуха может переноситься на значительные расстояния.

Эпидемиология. Вирус вызывает два клинических варианта: ветряную оспу, опоясывающий герпес. Считают, что ветряная оспа – это проявление первичной инфекции в восприимчивом организме (чаще у детей), так как опоясывающий герпес – это реактивация инфекции в иммунном и ослабленном организме. Пути передачи инфекции – воздушно-капельный, реже – контактно– бытовой и вертикальный. Источником инфекции является человек, больной ветряной оспой или опоясывающим герпесом. Больной заразен в последние 1—2 дня инкубационного периода и до 5 дня от появления последних везикул. Вирус в большом количестве находится в содержимом пузырьков и отсутствует в корочках. После перенесенного заболевания вырабатывается стойкий иммунитет. После перенесенной инфекции вырабатываются вируснейтрализующие антитела, которые не предотвращают развития латентной инфекции. Вирус длительно персестирует в клетках спинальных ганглиев, ганглиях лицевого и тройничного нервов, что объясняется тропизмом вируса к нервной ткани. На фоне иммунодефицитных состояний возможна реактивация инфекции в виде опоясывающего герпеса.

Патогенез. Возбудитель проникает в организм воздушно-капельным путем через слизистые оболочки верхних дыхательных путей. После окончания периода инкубации наступает вирусемия. Фиксация вируса происходит в эпителии кожи и клетках слизистых оболочек, вследствие чего появляется характерная сыпь. Может происходить персистенция вируса в организме и под воздействием каких-либо провоцирующих факторов – его активация. Это может выражаться в виде локальных высыпаний на коже – опоясывающего герпеса или опоясывающего лишая.

Клиника. Период инкубации может длиться 11—21 день, в среднем около 14 дней. Заболевание начинается остро: повышается температура тела, возникают симптомы интоксикации, понижается аппетит. Одновременно на всем теле появляется сыпь с элементами в виде мелких папул, которые быстро превращаются в везикулы. Через 1—3 дня везикулы подсыхают, и на их месте образуются корочки, отпадающие на 2—3-й неделе болезни. После них на коже остается легкая пигментация. Рубцы не образуются. Зуд кожных покровов наблюдается у детей раннего возраста и лиц, склонных к аллергическим реакциям. Высыпают новые элементы вследствие неодновременного их созревания сыпь характеризуется полиморфизмом. Элементы ветряночной сыпи появляются сразу на всех кожных покровах, в том числе на волосистой части головы, а также на слизистой полости рта, конъюнктивах. Кожа ладоней и стоп сыпью не покрывается. Элементы не сливаются. Фон кожи неизменен. Ослабленные дети сталкиваются с очень редкой формой – генерализованной ветряночной инфекцией с поражением висцеральных органов, которая может закончиться летальным исходом больного. Следствием возникновения этой формы может стать лечение кортикостероидами и цитостатическими препаратами.

Классификация: типичная и атипичная формы. К атипичным относятся рудиментарная, генерализованная, геморрагическая, пустулезная, гангренознаяформы. Осложнения развиваются редко и связаны с присоединением вторичной бактериальной инфекции (абсцессов, флегмонов, пневмоний, энцефалитов, отитов, синуситов, конъюнктивитов, рожи, скарлатины, лимфаденитов, стоматитов).

Диагноз устанавливается на основании анамнеза, жалоб, клинических и лабораторных данных. В анализе крови – лейкопения, лимфоцитоз, СОЭ нормальная. При необходимости могут быть использованы такие лабораторные методы, как электронная микроскопия окрашенных серебрением мазков содержимого везикул, вирусоскопия, ИФА, РСК, реакция нейтрализации.

Дифференциальный диагноз проводится со стрептодермией, генерализованной формой простого герпеса, укусами насекомых.

Лечение. Лечение проводится в амбулаторных условиях, при тяжелом течении с осложнениями со стороны ЦНС и гнойными осложнениями или по эпидемиологическим показаниям больные госпитализируются в стационар. Постельный режим в первые 2—3 дня болезни, витаминотерапия, обильное питье, диета по возрасту. Гигиеническое содержание больного с предупреждением вторичной инфекции. Везикулы смазывают 1—2%-ным раствором перманганата калия, 1%-ным раствором бриллиантового зеленого, слизистые полости рта обрабатывают водным раствором анилиновых красителей и другими дезинфицирующими средствами. Противовирусная этиотропная терапия проводится ацикловиром. В тяжелых случаях назначение специфического варицелло-зостерного иммуноглобулина в/м. Применяются препараты индукторы интерферона – циклоферон, неовир – при выраженном иммунодефиците.

Прогноз благоприятный.

Профилактика. Больной подлежит изоляции на дому до 5-го дня с момента появления последнего элемента сыпи. Дезинфекция не производится. Детей в возрасте до 3 лет, бывших в контакте с больным ветряной оспой и не болевших ею ранее, разобщают с 11-го по 21-й день, считая с момента контакта.

 

 

 

         Особо опасные инфекции. (бруцеллы и  бациллы сибирской язвы).

 

План лекции:
1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

    Эти возбудители вызывают инфекции, относящиеся к группе особо опасных (из бактериальных инфекций к их числу относят чуму, холеру, сибирскую язву, туляремию, сап и бруцеллез).

Сибирская язва.

Возбудитель сибирской язвы - Bacillus anthracis относится к роду Bacillus семейства Bacillaceae (к бациллам).

Морфология. Крупная грамположительная палочка, часто с закругленными концами. В отличии от других бацилл - неподвижна, хорошо окрашивается анилиновыми красителями. В клинических материалах расположены парами или в виде коротких цепочек, окруженных общей капсулой (образуется только в организме человека и животных или на специальных средах с кровью, сывороткой крови). На средах возбудитель образует длинные цепочки в виде “бамбуковой трости” (с уточщениями на концах и сочленениями клеток). На агаре, содержащем пенициллин, происходит разрушение клеточных стенок, образуются шаровидные протопласты в виде цепочек (“жемчужное ожерелье”). Возбудитель сибирской язвы образует эндоспоры, которые располагаются центрально, их диаметр не превышает диаметра бактериальной клетки. Споры образуются только вне организма, при наличии (доступе) кислорода и определенной температуре (от +12 до +43о С, оптимум при 30-35о С). Споры проявляют очень высокую устойчивость во внешней среде (десятилетия). Сибирская язва - прежде всего почвенная инфекция.

Культуральные свойства. Возбудитель растет в аэробных и факультативно - анаэробных условиях. Температурный оптимум +37о С, рН -7,2-7,6. Растет на простых питательных средах, в т.ч. на картофеле, настое соломы, экстрактах злаковых и бобовых культур. Дает характерный рост при посеве уколом в желатин (“перевернутая елочка”). Вирулентные R- формы на плотных средах образуют шероховатые серовато - белые колонии волокнистой структуры (“голова медузы” или “львиная грива”). На жидких средах образуется осадок в виде комочка ваты. Возбудитель сибирской язвы может образовывать также гладкие (S), слизистые (М) или смешанные (SM) колонии, особенно в микроаэрофильных условиях. В S- форме возбудитель утрачивает вирулентность.

Биохимические свойства. B.anthracis биохимически высоко активна. Она ферментирует с образованием кислоты без газа глюкозу, сахарозу, мальтозу, трегалозу, образует сероводород, свертывает и пептонизирует молоко.

Антигенная структура. Выделяют три основных группы антигенов - капсульный антиген, токсин (кодируются плазмидами, при их отсутствии штаммы авирулентны), соматические антигены.

Капсульные антигены отличаются по химической структуре от К- антигенов других бактерий, полипептидной природы, образуются преимущественно в организме хозяина.

Соматические антигены - полисахариды клеточной стенки, термостабильны, долго сохраняются во внешней среде, трупах. Выявляют их в реакции термопреципитации Асколи.

Токсин включает протективный антиген (индуцирует синтез защитных антител), летальный фактор, отечный фактор.

Факторы патогенности - капсула и токсин.

Краткая эпидемиологическая характеристика. Сибирская язва - зоонозная инфекция. Основной источник для человека - травоядные животные. Их заражение происходит преимущественно алиментарным путем, споры длительно сохраняются в почве и заглатываются животными преимущественно с кормами, травой). Особую опасность представляют сибиреязвенные скотомогильники (в них споры длительно сохраняются, при их разрывании, размывании и других процессах попадают на поверхность почвы и растения). Человек заражается при контакте с инфицированным материалом (уход за больными животными, разделка и употребление в пищу инфицированных мясных продуктов, контакт со шкурами сибиреязвенных животных и др.).

Основные формы клинического проявления зависят от входных ворот инфекции - кожная (карбункул), кишечная, легочная, септическая. Характерна высокая летальность (меньше при кожной форме).

Лабораторная диагностика. Материал для исследования от больных зависит от клинической формы. При кожной форме исследуют содержимое пузырьков, отделяемое карбункула или язвы, при кишечной - испражнения и мочу, при легочной - мокроту, при септической - кровь. Исследованию подлежат объекты внешней среды, материал от животных, пищевые продукты.

Бактериоскопический метод используют для обнаружения грамположительных палочек, окруженных капсулой, в материалах от человека и животных, спор - из объектов внешней среды. Чаще применяют метод флюоресцирующих антител (МФА), позволяющий выявлять капсульные антигены и споры.

Основной метод - бактериологический применяется в лабораториях особо опасных инфекций по стандартной схеме с посевом на простые питательные среды (МПА, дрожжевая среда, среда ГКИ), определением подвижности, окраской по Граму и изучением биохимических особенностей. В дифференциации от других представителей рода Bacillus существенное значение имеет биологическая проба. Белые мыши погибают в пределах двух суток, морские свинки и кролики - в течение четырех суток. Определяют также лизабельность бактериофагами, чувствительность к пенициллину (жемчужное ожерелье). Для ретроспективной диагностики используют серологические тесты, аллергическая проба с антраксином, для выявления соматического антигена - реакция Асколи, которая может быть результативна при отрицательных результатах бактериологических исследований.

Профилактика. Применяют живую споровую безкапсульную вакцину СТИ, протективный антиген.

Род Brucella. Бруцеллез.

Род объединяет мелкие неподвижные палочки или коккобациллы, обладающие значительным полиморфизмом. Аэробы, оптимум температуры около +37о С, рН - 6,6- 7,4. Факультативные внутриклеточные паразиты, хорошо окрашиваемые анилиновыми красителями.

Патогенные для человека четыре вида - B.melitensis (распространена преимущественно среди мелкого рогатого скота, вызывает наиболее тяжелые поражения у человека), B.abortus (связана с крупным рогатым скотом), B.suis, B.canis. Основным хозяином B.suis 4 биовара являются северные олени, этот возбудитель часто называют B.rangiferis. От грызунов выделены бруцеллы вида B.neotomae, от овец - B.ovis. B.melitensis разделена на 3 биовара, B.abortus - на 9, B.suis - на 5 биоваров. Бруцеллы - возбудители зоонозной инфекции человека и животных - бруцеллеза. Возбудитель легко диссоциирует, переходя из S- в R- форму.

Культуральные свойства. Лучше растут на обогащенных средах сложного состава с добавлением крови или сыворотки крови, глюкозы, глицерина. Используют печеночный агар Хеддльсона, кровяной агар, мясо - пептонный бульон. Колонии возбудителя в S- форме мелкие, выпуклые, гладкие, с перламутровым оттенком, при диссоциации образуют широховатые R- формы колоний. Характерен медленный рост бруцелл в первых генерациях - колонии образуются через 2-4 недели. Рост бруцелл на жидких средах сопровождается равномерным помутнением сред.

Бруцеллы имеют поверхностный L- антиген (сходен с Vi- антигенами сальмонелл). Шероховатые формы содержат специфический R- антиген, для его идентификации используют специфические антисыворотки, применяемые при серотипировании. Колонии B.canis, B.ovis и B.suis 5 биотипа всегда имеют R- форму. Многие антигенные фракции бруцелл обладают выраженным аллергизирующим действием. У бруцелл имеются перекрестнореагирующие антигены с возбудителем туляремии, Bordetella bronchiseptica и Y.enterocolitica серотипа 09.

Биохимические свойства. Бруцеллы ферментируют углеводы, однако при дифференциации на виды и биотипы используют ряд дополнительных признаков, в т.ч. способность расти на средах в присутствии обладающих бактериостатическим действием на отдельные виды бруцелл красителей (основной фуксин, тионин, сафранин), выделять сероводород, образовывать ферменты (уреазу, фосфатазу, каталазу), окислять различные аминокислоты.

Эпидемиологические особенности. Бруцеллез - зооноз преимущественно сельскохозяйственных и домашних животных. Человек инфицируется от животных или при контакте с инфицированным сырьем животного происхождения. Бруцеллез может носить профессиональный характер (уход за инфицированными животными) или быть связан с употреблением недостаточно термически обработанных молочных или мясных продуктов. Возбудитель может внедряться в организм человека через поврежденную кожу, слизистые дыхательных путей (аэрогенно) и желудочно - кишечного тракта (алиментарным путем), при заносе возбудителя на конъюнктиву глаза. Пути заражения - контактный, алиментарный и аспирационный. Бруцеллы обладают относительно высокой устойчивостью во внешней среде.

Лабораторная диагностика осуществляется с использованием бактериологических методов, биопробы, серологических реакций, аллергической пробы Бюрне, генетических методов.

Специфическая профилактика. В очагах козье - овечьего бруцеллеза применяют живую бруцеллезную вакцину ЖБВ. Разработана химическая бруцеллезная вакцина, которая отличается от живой вакцины более низкой реактогенностью.

 

 

  Санитарно – бактериологическое исследование хирургического материала.

План лекции:

1.Морфология

2.Культивирование

3.Устойчивость

4.Пути передачи

5.Клиника

6.Иммунитет.

7.Лабораторная диагностика

8.Профилактика

 

Посевы исследуемого материала производят в боксе, соблюдая правила асептики. Выявляют аэробную и анаэробную микрофлору.

Для проведения посевов необходимы:

1) набор стерильных инструментов (ножницы, корнцанги, анатомические пинцеты);

2) стерильный 10% раствор гипосульфита;

3) стерильная дистиллированная вода;

4) питательные среды: сахарный бульон Хоттингера, среда Сабуро и тиогликолевая среда.

Материал для исследования направляют в день его стерилизации в закрытых и опечатанных биксах.

Исследованию подлежат: бинты, тампоны, ватные шарики, марлевые салфетки и шовный материал (кетгут и шелк).

Материал, подлежащий исследованию, достают из бикса стерильным пинцетом, над пламенем горелки вырезают из разных участков кусочки, помещают их в стерильные чашки Петри и производят посев каждого образца в 2 пробирки сахарного бульона и среду Сабуро.

Шовный материал. Кетгут сохраняют в спиртовом растворе йода. Для нейтрализации йода кетгут помещают на 24 ч в баночку с 10% раствором гипосульфита и на 24 ч в стерильную дистиллированную воду. Шелк сохраняют в спирте, а перед посевом моток шелка выдерживают 24 ч в стерильной дистиллированной воде.

Подготовленный таким образом шовный материал стерильным пинцетом извлекают из дистиллированной воды, кладут в чашку Петри, стерильными ножницами разрезают на куски длиной 2-5 см. Отдельные кусочки засевают на 2 пробирки каждой из вышеуказанных сред.

Посевы ставят в термостат при температуре 37° С, инкубируют 12-14 дней, просматривая их каждый день (посевы на среде Сабуро инкубируют при 20-22° С). При наличии роста в пробирках материал признается нестерильным.

 

Напишите нам

Рабочий день

пн - пт 08:00-17:00

обед 12:00-13:00

выходной: сб.вс.

Абитуриентам

УВАЖАЕМЫЙ АБИТУРИЕНТЫ!

ДОБРО ПОЖАЛОВАТЬ В БИШКЕКСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ!

Контактные данные

Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.
+(312) 30 09 08

+(000) 30 10 84 

Скачать шаблоны Joomla 3.9.